Nghiên cứu xây dựng quy trình bào chế viên nang cứng Testin qua các giai đoạn sau:
- Bào chếcao đặc bán thành phẩm.
- Xây dựng công thức và bào chế viên nang cứng Testin.
2.1.Bào chế cao đặc bài thuốc Testin: 2.1.1. Bào chế cao đặc: 2.1.1. Bào chế cao đặc:
Dược liệu được kiểm tra chất lượngđạt tiêu chuẩn DĐVN IV[7], được bào chế thànhdạng thuốc phiến, chiết xuất với dung môi ethanol 40% bằng cácphương
phápkhác nhau. Tính hiệu suấtbào chế trung bình của từng phương pháp để so sánh và lựa chọn phương pháp chiết xuất phù hợp.
2.1.1.1. Chiết hồi lưu:
- Chiết bằng bộ dụng cụđun hồi lưu, dung môi ethanol 40%.
- Lần 1: Cân lượng dược liệu tương ứng5 thang thuốc: xà sàng tử, bạch tật lê, câu kỉ tửđược cho vào túi nhỏ, thắt chặt miệng lại. Tất cảcác dược liệu được đưa vào giỏ sắc thuốc. Thêm dung môi ethanol 40% (3 lít) vào đến ngập dược liệu. Đun sôi trong 1 giờ rồi rút lấy dịch chiết.
- Lần 2: Thêm tiếp dung môi ethanol 40% đến ngập dược liệu, đun sôi trong 1h, rút lấy dịch chiết.
- Lần 3: Tiến hành tương tự lần 2.
- Gộp dịch chiết 3 lần lại, để lắng, gạn lấy phần dịch trong. Phần còn lại lọc qua bông.
2.1.1.2. Chiết ngâm lạnh 2 ngày:
- Chiết bằng bộ dụng cụ ngâm lạnh, dung môi ethanol 40%.
- Lần 1: Cân lượng dược liệu tương ứng5 thang thuốc: xà sàng tử, bạch tật lê, câu kỉ tửđược cho vào túi nhỏ, thắt chặt miệng lại. Tất cảcác dược liệu được đưa vào bình ngâm lạnh. Thêm dung môi ethanol 40% (2 lít) đến ngập dược liệu. Ngâm lạnh trong 2 ngày rồi gạn lấy dịch chiết.
- Lần 2: Thêm tiếp dung môi ethanol 40% đến ngập dược liệu. Ngâm lạnh trong 2 ngày rồi gạn lấy dịch chiết.
- Lần 3: Tiến hành tương tự lần 2.
- Gộp dịch chiết 3 lần lại, để lắng, gạn lấy phần dịch trong. Phần còn lại lọc qua bông.
2.1.1.3. Chiết ngâm lạnh 3 ngày:
- Chiết bằng bộ dụng cụ ngâm lạnh, dung môi ethanol 40%.
- Lần 1: Cân lượng dược liệu tương ứng5 thang thuốc theo công thức 1: xà sàng tử, bạch tật lê, câu kỉ tử được cho vào túi nhỏ thắt chặt miệng lại. Tất cả các
dược liệu được đưa vào bình ngâm lạnh. Thêm dung môi ethanol 40% (2 lít) đến ngập dược liệu. Ngâm lạnh trong 3 ngày rồi gạn lấy dịch chiết.
- Lần 2: Thêm tiếp dung môi ethanol 40% đến ngập dược liệu. Ngâm lạnh trong 3 ngày rồi gạn lấy dịch chiết.
- Lần 3: tiến hành tương tự lần 2.
- Gộp dịch chiết 3 lần lại, để lắng, gạn lấy phần dịch trong. Phần còn lại lọc qua bông.
2.1.2. Xử lý dịch chiết:
- Cất thu hồi dung môi, thu được cao lỏng với thể tích bằng 1/3 thể tích ban đầu. - Dịch chiết sau khi thu hồi dung môi được ly tâm 5000 vòng/phút trong 30
phút.
- Dịch ly tâm được lọc qua bông, sau đó cô cách thủy thành cao đặc.
2.1.3. Tính hiệu suất bào chế:
Mỗi phương pháp làm 3 mẫu, tính hiệu suất bào chế trung bình theo phần trăm cao khô tuyệt đối trên dược liệu khô tuyệt đối (kí hiệu H) theo công thức sau: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
H = ×( ) (1)
Trong đó m1: Khối lượng dược liệu khô tuyệt đối (g). m2: Khối lượng cao đặc (g).
X: Độẩm của cao đặc (%).
Để tính được khối lượng dược liệu khô tuyệt đối cần xácđịnh độẩm của từng dược liệu. Phương pháp xácđịnh độẩm của dược liệu như sau:
Sử dụng phương pháp mất khối lượng do làm khô (DĐVN IV PL 9.6) để đo độ ẩm của 6 dược liệu không chứa thành phần dễ bay hơi: Hoàng kỳ, Cốt khí củ, Ba kích, Câu kỉ tử, Bá bệnh, Bạch tật lê.
Sử dụng phương pháp cất với dung môi toluen (DĐVN IV PL 12.13) đểđo độ ẩm của 2 dược liệu chứa thành phần dễ bay hơi là Đương quy và Xà sàng tử [5], [19], [21].
m1 = n . ∑ .( )(2) với m1 là khối lượng dược liệu khô (g)
mi là khối lượng mỗi dược liệu (g)
Xilà độẩm của mỗi dược liệu tương ứng (%) n là số thang thuốc chiết trong một lần.
2.1.4. Kiểm tra chất lượng cao đặc:
Cao đặc chiết xuất theo phương pháp nào được lựa chọn để tiến hành bào chế viên nang cứng cần được kiểm tra chất lượng đểđảm bảo tính ổnđịnh của nguyên liệu đầu vào. Cao đặc được kiểm tra theo các chỉ tiêu và phương pháp tiến hànhnhư sau:
2.1.4.1. Hình thức:
Kiểm tra thể chất, độđồng nhất, màu sắc, mùi vị theo PL 1.1 DĐVN IV.
2.1.4.2. Độ ẩm:
Sử dụng phương pháp mất khối lượng do làm khô (PL 9.6 DĐVN IV) để xác định độẩm của cao đặc. Tiến hành như sau:
- Dùng đĩa thủy tinh đáy bằng làm bì đựng mẫu thử; làm khô bì trong thời gian 30 phút trong tủ sấy ở 70°C rồi cân đểxác định khối lượng bì.
- Cân ngay vào bì này một lượng chính xác khoảng 2,00 g cao, dàn mỏng thành lớp có độ dày không quá 5 mm.
- Tiến hành làm khô trong tủ sấy ở nhiệt độ 70°C. Sau khi sấy phải làm khô đến nhiệt độ phòng cân trong bình hút ẩm chứa silica gel rồi cân ngay. Làm khô đến khối lượng không đổi, tức là sự chênh lệch khối lượng sau khi sấy thêm 1 giờ trong tủ sấy so với lần sấy trước đó không quá 0,5 mg. Làm 3 mẫu, lấy kết quả trung bình.
2.1.4.3. Xác định pH:
- Pha dung dịch cao đặc 1% (kl/tt): Cân chính xác khoảng 1 g cao đặc cho vào cốc có mỏ, hòa tan, chuyển dần cao ở trong cốc bằng nước cất vào bình định mức 100 ml, thêm nước cất đến vạch.
- Hiệu chuẩn máy đo pH lần lượt bằng các dung dịch đệm chuẩn có pH = 7, pH = 10 và pH = 4.
- Nhúng điện cực vào dung dịch cao đặ1% và đo trị số pH ởcùng điều kiện đo của các dung dịch đệm chuẩn khi hiệu chuẩn máy. Làm 3 mẫu, lấy kết quả trung bình (PL 6.2 DĐVN IV).
2.1.4.4. Định tính một số vị thuốc trong cao đặc bằng SKLM:
Bá bệnh, Ba kích, Bạch tật lê và Xà sàng tử là 4 vị thuốc chính có tác dụng bổ dương, vì vậy trong khóa luận này, chúng tôi lựa chọn tiến hành kiểm tra sự có mặt của 4 vị thuốc này trong cao đặc.
- Chuẩn bị dịch chấm sắc ký:
Dịch chiết cao đặc: Lấy 1g cao đặc, ngâm trong 30ml ethanol 96% trong 3 giờ, lọc, dịch lọc đem bốc hơi dung môi còn khoảng 1ml được dịch chấm sắc ký của cao đặc.
Dịch chiết dược liệu: Cân sốgam dược liệu tương ứng có trong 1 g cao đặc tán nhỏ thành bột. Cho riêng mỗi vị thuốc vào bình nón, ngâm trong ethanol 96%, 3 lần, mỗi lần 10ml trong 1h, gạn lấy dịch, lọc, bốc hơi dung môi còn 1ml để chấm sắc ký.
- Hoạt hóa bản mỏng Silicagel GF 254 ở 105°C trong 1h. - Hệ dung môi khai triển: [7], [11]
Bá bệnh : Cloroform:ethyl acetat (7:3) Xà sàng tử : Cloroform:ethyl acetat (9:1) Bạch tật lê : Cloroform:methanol (19:1)
Ba kích : Toluen:ethyl acetat:acid formic (8:2:0,1) - Phát hiện vết bằng cách soi dưới đèn UV với λ = 366 nm. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2.1.4.5. Định lượng cắn ethylacetat:
Lấy chính xác 5,00 g cao đặc, hòa tan trong 25 ml nước, cho vào bình gạn, lắc loại tạp với ether dầu hỏa 3 lần, mỗi lần 15 ml, lấy lớp nước. Đun nóng nhẹ lớp nước để đuổi hết ether dầu hỏa dư, chiết với ethyl acetat nhiều lần cho đến khi kiểm tra dịch chiết không còn flavonoid (kiểm tra bằng thuốc thử Cyanidin). Gộp
các dịch chiết ethyl acetat lại, cô trên bếp cách thủy đến cắn, đem sấy khô ở 80°C tới khối lượng không đổi. Làm 3 lần lấy kết quả trung bình [3], [4], [11].
Công thức tính hàm lượng cắn ethylacetat trong cao đặc: X = ( ).
.( )
Trong đó X: hàm lượng cắn ethylacetat trong cao đặc (%) b: Tổng khối lượng cắn và cốc (g)
mc: Khối lượng cốc (g)
m: Khối lượng cao đem thử (g) H: Hàm ẩm của cao (%).
2.2.Bào chế viên nang cứng Testin:
2.2.1. Xây dựng công thức và phương pháp bào chế viên nang cứng Testin:
Dựa trên các thông số về khả năng bào chế, biểu đồ độ ẩm theo thời gian sấy (đánh giá khả năng sấy khô của hạt), hiệu suất tạo hạt, tỷ lệ hạt có kích thước dưới 180μm, tỷ trọng biểu kiến, chỉ số nén, tiến hành khảo sát công thức và phương pháp bào chế viên nang cứng Testin như sau:
- Cốđịnh phương pháp tạo hạt, thay đổi loại và tỷ lệtá dượcđể lựa chọn công thức bào chế viên nang cứng Testin thích hợp. Phương pháp tạo hạt sử dụng trong quá trình khảo sát công thức bào chế là phương pháp tạo hạt 1.
Phương pháp tạo hạt1:
Trộn đều tá dược độn theo phương pháp đồng lượng.
Trải đều cao đặc lên hỗn hợp tá dược và trộn đến khi cao thấm đều vào khối bột.
Xát hạt qua rây cỡ 1mm.
Sấy hạt: Rải hạt thành lớp mỏng và sấy tĩnhở 60°C.
Sửa hạt qua rây cỡ 1mm[9], [11].
- Sau khi lựa chọn được loại tá dược tốt nhất, sử dụng phương pháp tạo hạt 2 thay thế và so sánh với phương pháp tạo hạt 1 để lựa chọn phương pháp thích hợpbào chế viên nang cứng Testin.
Phương pháp tạo hạt2:
Trộn đều cao đặc với tá dược hút, sấy khô ở 50-60°C, xay mịn, rây qua rây 250μm.
Làmẩm tá dược rã với ethanol 96% vừađủ.
Phân tán đều tá dược rã vào bột cao (đã có tá dược hút).
Xát hạt qua rây cỡ 1mm.
Sấy hạt: Rải hạt thành lớp mỏng và sấy tĩnhở 60°C.
Sửa hạt qua rây 1mm[6].
- Tiến hànhđóng nang (nang số 0) ở quy mô lớn (2000 viên).
2.2.2. Đánh giá chất lượng củabán thành phẩm dạng hạt:
Tạo hạt 3 lần, mỗilần tương ứng với500 viên, đánh giá bán thành phẩm dạng hạt dựa trên các tiêu chuẩn sau:
- Hình thức: Kiểm tra bằng cảm quan. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Độẩm: Xácđịnh theo phương pháp mất khối lượng do làm khô bằng phương pháp cân theo DĐVN IV, PL 9.6; xây dựng biểu đồđộẩm của khối hạt theo thời gian sấy.
- Tỷ lệ hạt có kích thước< 180 μm: rây khoảng 50 g hạt quarây 180μm, tính tỷ lệ khối lượng hạt ở dưới rây so với tổng khối lượng hạt.
- Tỷ trọng biểu kiến: dựa theo công thức: dbk = với dbk là tỷ trọng biểu kiến
m là khối lượng bộtđem đo
Vbk là thể tích biểu kiếnđọc được sau khi sử dụng máy gõ trong 5 phút[9]. - Chỉ số nén Carr: dựa theo công thức
C = ( )
với C là chỉ số nén Carr dbk là tỷ trọng biểu kiến
dt là tỷ trọng thô, được tính bằng tỷ lệ giữa khối lượng và thể tích trước khi gõ của khối bột[9].
Mối quan hệ giữa chỉ số nén và khả năng trơn chảy của khối bột thể hiệnở bảng sau:
Bảng 4.Chỉ số nén và khả năng trơn chảy của khối bột [20]
Chỉ số nén (%) Khả năng trơn chảy
< 10 Rất tốt 11 – 15 Tốt 16 – 20 Khá tốt 21 – 25 Bình thường 26 – 31 Kém 32 – 37 Rất kém > 38 Cực kì kém
- Tốc độ chảy của khối hạt: cân 50 g hạtđã trộn tá dược trơn cho chảy qua phễu có đường kính 10 mm, dùng máyđo tốc độ chảy của khối hạt (g/s).
2.2.3. Đánh giá chất lượng của viên nang cứng Testin:
Hạt sau khi được kiểm tra chất lượng sẽđượcđem đóng thành viên nang cứng (2000 viên). Đánh giá viên nang cứng Testin dựa trên các tiêu chuẩn sau:
2.2.3.1. Hình thức:
Kiểm tra bằng cảm quan.
2.2.3.2. Độ ẩm của hạt trong nang:
Xác định bằng phương pháp mất khối lượng do làm khô PL 9.6, DĐVN IV. Làm 3 lần, lấy kết quả trung bình.
2.2.3.3. Độ đồng đều khối lượng:
Thử với 20 nang. Cân từng nang, tháo nắp nang đổ hết thuốc ra, lau sạch vỏ nang. Cân từng vỏ nang. Khối lượng thuốc trong nang là hiệu số giữa khối lượng nang thuốc và vỏ nang, tính khối lượng trung bình của thuốc trong nang. Không được quá hai đơn vị có khối lượng nằm ngoài giới hạn cho phép (± 7,5%) và không có đơn vị nào có khối lượng vượt gấp đôi giới hạn đó (PL 11.3, DĐVN IV).
2.2.3.4. Độ rã:
Thửđộ rã của 6 viên nang trong môi trường nước cất ở 37°C bằng máy đo độ rã. Thuốc được coi là rã, khi đáp ứng một trong những yêu cầu sau:
- Không còn cắn trên mặt lưới.
- Nếu còn cắn, đấy là khối mềm không có màng nhận thấy rõ, không có nhân khô. - Chỉ còn những mảnh vỏ nang trên mặt lưới hay dính vào mặt dưới của đĩa (PL
11.6, DĐVN IV).
2.2.3.5. Định tính một số vị thuốc trong viên nang bằng SKLM:
Tiến hành như ở mục 2.1.4.4 chương 2 (trang 21), thay dịch chiết cao đặc bằng dịch chiết chế phẩm.
Dịch chiết chế phẩm: Lấy lượng thuốc tương đương với 1 g cao đăc, nghiền mịn, ngâm trong 30 ml ethanol 96% tron 3h, dịch lọc đem bốc hơi dung môi còn khoảng 1 ml được dịch chấm sắc ký của chế phẩm.
2.2.3.6. Định lượng cắn ethylacetat: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Cân một lượng hạt trong nang tương đương với 5 g cao đặc. Tiến hành định lượng như với cao đặc (mục 2.1.4.5 chương 2 trang 22). Công thức tính hàm lượng cắn ethylacetat trong viên nang:
X’ = ( ).
Trong đó X’ là hàm lượng cắn ethylacetat trong viên nang b là khối lượng cắn và cốc
mc là khối lượng cắn
m’ là khối lượng bột chế phẩm đem cân. Làm với 3 mẫu, lấy kết quả trung bình.
CHƯƠNG 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 1. Bào chế cao đặc Testin:
1.1.Xácđịnhđộ ẩm của dược liệu:
Tiến hành xácđịnh độẩm của các dược liệu nhưở mục2.1.3 chương 2 trang 19 - 20. Kết quả thu được như sau:
Bảng 5.Độẩm của các dược liệu
Dược liệu Độ ẩm (%) Dược liệu Độ ẩm (%)
Bá bệnh 11,37 Bạch tật lê 9,12
Xà sàng tử 9,60 Hoàng kỳ 8,28
Cốt khí củ 9,14 Câu kỉ tử 9,92
Đương quy 10,08 Ba kích 9,37
Các dược liệu đều có độẩmđạt theo tiêu chuẩn của DĐVN IV, trừ Bá bệnh do chưa có tài liệu chuẩn hóa để so sánh.
Theo công thức (2) mục 2.1.3 chương 2 trang 20, khối lượngdược liệu khô của5 thang Testin là: m1 = 443,04g.
1.2.Bào chế cao đặc:
Tiến hànhbào chế cao đặc theo phương phápở mục2.1 chương 2 (trang 17 – 19).
Theo công thức (1) mục 2.1.3 chương 2 (trang 19), ta tính đượchiệu suất chiết xuấttheo phần trăm cao khô tuyệt đối trên dược liệu khô tuyệt đối củacác phương pháp khác nhau. Kết quảđược trình bàyở bảng6, 7, 8.
Bảng 6. Hiệu suấtbào chếtheo phương pháp chiết hồi lưu
Mẫu Khối lượng cao – m2 (g) Độ ẩm cao đặc – X2 (%) H (%)
1 158,16 19,72 28,66
2 151,79 18,13 28,05
3 154,28 18,79 28,28
Bảng 7.Hiệu suấtbào chếtheo phương pháp ngâm lạnh 2 ngày
1 142,88 17,49 26,61
2 146,12 19,32 26,61
3 139,54 17,29 26,50
Bảng 8.Hiệu suấtbào chếđược theo phương pháp ngâm lạnh 3 ngày
Mẫu Khối lượng cao – m2 (g) Độ ẩm cao đặc– X2 (%) H (%) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
1 133,30 17,21 24,91
2 135,73 18,20 25,06
3 141,08 19,86 25,52
Nhận xét: Bào chếcao đặc theo phương pháp chiết hồi lưu cho hiệu suất chiết xuất theo phần trăm cao khô tuyệt đối trên dược liệu khô tuyệt đối tương đối ổn định, tuy lượng có cao hơn so với hai phương pháp chiết lạnh nhưng không nhiều và tiết kiệm thời gian hơn, phù hợp với phạm vi thời gian cho phép của đề tài. Do đó, cao đặc chiết theo phương pháp chiết hồi lưu được sử dụng để làm nguyên liệu bào chế viên nang cứng tiếp theo.
Hình 1. Quy trình bào chếcao đặc
1.3.Kiểm tra chất lượng của cao đặc chiết theo phương pháp đun hồi lưu:
Cao đặc chiết theo phương pháp đun hồi lưu được lựa chọn làm nguyên liệu để bào chế viên nang cứng Testin, do đó cần tiến hành khảo sát các thông số của cao đặc để đảm bảo tính ổnđịnh của nguyên liệu đầu vào cho bào chế. Kết quảđánh giá được tóm tắt trong bảng 9.
Bảng 9. Kết quảđánh giá chất lượng cao đặc bán thành phẩm
Tiêu chuẩn Mẫu 1 Mẫu 2 Mẫu 3 TB
Hình thức Cao có thể chất mềm, đồng nhất, màu nâu đen, vị đắng, hơi cay
Độẩm 19,09% 18,42% 18,70% 18,74%
pH (dung dịch 1% kl/tt) 4,02 4,03 4,11 4,05
thuốctrong cao đặc bằng SKLM vớivết trong sắc ký đồ của 4 vị thuốc Bá bệnh, Ba kích, Bạch tật lê, Xà sàng tử. Kết quả được thể hiệnở hình 10, 11, 12, 13 mục2.4.1 chương 3 (trang 44 – 45). Hàm lượngcắn
ethylacetat (tính theo cao khô)
2,40% 2,49% 2,55% 2,48%
Nhận xét:
- Các thông số của cao đặc kháổnđịnh, đảm bảo tínhổn định của nguyên liệu đầu vào cho quá trình bào chế viên nang.
- Từđó chúng tôi xin đề xuất một sốchỉ tiêu chất lượng của cao đặc đầu vào cho quá trình bào chếcao đặc như sau:
Hình thức: Thể chất mềm, đồng nhất, màu nâu đen, vịđắng, hơi cay. Độẩm: nằm trong khoảng 19% ± 1%.