* Mẫu cơ quan nội tạng : khí quản, phổi của gà mắc bệnhđược lấy mẫu và bảo quản trong formalin 10%. Trên mỗi lọ mẫu đều có ghi các thông tin về: tuổi giống, địa điểm và ngày tháng lấy mẫu.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 39 *Quy trình làm tiêu bản vi thểđược tóm tắt qua các bước sau:
1. Các mẫu phủ tạng cắt mỏng 0,5 cm (mẫu nhỏ để nguyên) ngâm trong dung dịch formalin 10% trong 48h (chú ý thể tích formalin gấp 10 lần thể tích mẫu và bệnh phẩm phải ngập trong formalin).
2. Miếng tổ chức cốđịnh trong formalin được lấy ra và cắt mỏng 2 - 3µm, rửa dưới nước chảy trong 2 - 3 h.
3. Chuyển sang ngâm trong cồn 700 trong 2 - 3h. 4. Ngâm sang cồn 900 trong 2 - 3h.
5. Ngâm sang cồn tuyệt đối trong 2 - 3h. 6. Ngâm sang xylen 1 để trong 2 - 3h. 7. Ngâm sang xylen 2 để trong 2 - 3h. 8. Ngâm tẩm nến 3 lần, mỗi lần 2 - 3h.
9. Đúc block: đặt miếng bệnh phẩm nằm vào chính giữa khuôn block, đổ
nhanh paraffin lỏng vào khuôn block. Để nguội cho đến khi block đông đặc. 10. Cắt và tãi mảnh
a) Cắt gọt khối block nến vuông, mặt cắt bằng phẳng, để trên mặt khay đá. b) Đặt mặt khối block nến song song với mép lưỡi dao, cắt chiều dày lát cắt 2 - 5µm.
c) Chọn lát cắt tiêu bản phẳng thả vào nồi chưng cất nhiệt độ nước 480C – 520C. Dùng lam kính vớt lát cắt đã phẳng. Để khô.
11. Nhuộm tiêu bản bằng Hematoxylin - Eosin a) Tẩy nến trong xylen 3 lần, mỗi lần 3 - 5 phút. b) Ngâm trong cồn tuyệt đối 3 - 5 phút.
c) Ngâm trong cồn 900 3 - 5 phút. d) Ngâm trong cồn 700 3 - 5 phút. e) Rửa dưới vòi nước chảy 3 - 5 phút.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 40 g) Rửa dưới vòi nước chảy 3 - 5 phút. Kiểm tra màu sắc nếu thấy xanh tím là được.Nếu nhạt màu, nhúng tiêu bản qua NaHCO3 1% (30 giây).Nếu thấy đậm màu, nhúng tiêu bản qua cồn axit (cồn 960 + HCl 1%) trong 30 giây.
h) Ngâm trong thuốc nhuộm Eosin 60 – 90 giây.
i) Rửa dưới vòi nước chảy 3 - 5 phút (chú ý màu của eosin).
k) Để khô trong nhiệt độ phòng hoặc ngâm trong cồn 900 và cồn tuyệt đối (mỗi lọ 1 phút), chuyển sang xylen 2 lần (mỗi lần 2-3 phút).
m) Gắn lamen bằng Baume canada: Nhỏ 1 giọt baume canada lên lamen rồi gắn nhanh lamen lên tiêu bản khi vẫn còn Xylen trên tiêu bản. Ấn nhẹđể dồn hết bọt khí ra ngoài.
12. Soi kiểm tra dưới kính hiển vi.