30 độ C 37 độ C
3.2.3.Kết quả thử hoạt tính phân giải fibrin của các mẫu nghiên cứu
Mục đích: Sơ bộ đánh giá khả năng tiêu fibrin của các mẫu dịch thu được từ môi trường nuôi cấy B. subtilis natto
Tiến hành: Tạo thạch fibrin theo phần 2.3.4. So sánh hoạt tính tiêu fibrin của các mẫu nghiên cứu và mẫu đối chứng Nattospes theo phương pháp khuếch tán trên thạch.
Kết quả:
Bảng 3.13. Đường kính vòng phân giải fibrin ( fibrin) của các mẫu
fibrin Các mẫu fibrin Mẫu trắng dd đệm phosphat 7,6 (MTr) (-) Dịch lên men 370C, 100v/p, 24h (D1) 15,97 Dịch lên men 370C, 150v/p, 24h (D5) 16,45 Nattospes (NP) (300FU/10ml) 21,23 Dịch chiết enzym 370C, 100v/p, 24h (T1) 19,10 Dịch chiết enzym 370C, 150v/p, 24h (T5) 20,43
Hình 3.4. Thạch thử khả năng phân giải fibrin của các mẫu nghiên cứu với Nattospes
Nhận xét:
Từ Bảng 3.13 nhận thấy, tất cả các mẫu dịch thu được từ môi trường nuôi
cấy B. subtilis natto đều có khả năng phân giải fibrin. Hoạt tính nattokinase được thể hiện qua đường kính vòng phân giải fibrin của các mẫu. Từ các giá trị fibrin thấy được hoạt độ nattokinase của mẫu là khác nhau. Các mẫu sau khi chiết bằng amoni sulfat 60% bão hòa đều cho đường kính vòng phân giải fibrin lớn hơn so với trong dịch lên men. Hoạt độ nattokinase tăng lên khi tăng tốc độ lắc ( fibrin của mẫu D5 lớn hơn mẫu D1; mẫu T5 lớn hơn mẫu D1). Mẫu Nattospes có fibrin lớn nhất (21,23mm). Mẫu T1, T5 cho fibrin tương đối cao (~ 90%; 96,23% so với mẫu Nattospes).
Bàn luận:
Protease ngoại bào của B. subtilis natto được chiết tách từ môi trường nuôi cấy vi khuẩn với phương pháp kết tủa bằng amoni sulfat 60% bão hòa. Trong
MTr
NP
D1 D5 D5
protease thu được sau khi chiết tách do những đặc tính xác định được đều phù hợp với kết quả của các nghiên cứu trước đó về nattokinase:
Là một protease do B. subtilis natto tạo ra trong quá trình sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn.
Có khả năng phân giải mạnh cơ chất fibrin [5], [36], [53].
Theo kết quả nghiên cứu của Đinh Thu Hương (2013) thì sau khi tinh chế dịch chiết enzym bằng amoni sulfat 60% qua cột Sephadex G – 75, phân đoạn 10 thể hiện khả năng phân giải fibrin tương đương với chế phẩm Nattospes, có hoạt độ khoảng 300FU/5ml. Vì vậy, tiếp tục nghiên cứu tinh chế enzym từ môi trường nuôi cấy B. subtilis natto để có thể sử dụng nattokinase làm dược phẩm trong điều trị một số bệnh lí có liên quan đến huyết khối như bệnh lí về tim mạch, huyết áp… bên cạnh các thực phẩm chức năng đang lưu hành trên thị trường.
Kết luận:
Từ kết quả trên có thể kết luận dịch chiết enzym bằng amoni sulfat 60% bão hòa của dịch lên men ở điều kiện (150v/p, 370C, 24h) có hoạt độ enzym khoảng 300FU/10ml.