sinh enzym ngoại bào của B. subtilis natto
3.2.1. Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ môi trường nuôi cấy tới khả năng sinh enzym ngoại bào của B. subtilis natto enzym ngoại bào của B. subtilis natto
Các kết quả của các nghiên cứu trước đây đã xác định trong môi trường nuôi cấy B. subtilis natto có mặt ba enzym ngoại bào: protease, amylase, cellulase [4], [15], [53]. Quá trình sinh tổng hợp enzym ngoại bào của vi sinh vật phụ thuộc rất nhiều vào nhiệt độ mơi trường ni cấy. Vì vây, thí nghiệm tiến hành khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ ni cấy tới hoạt độ ba enzym ngoại bào nói trên.
Mục đích: Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ môi trường nuôi cấy tới khả
năng sinh một số enzym ngoại bào của B. subtilis natto
Tiến hành: Nuôi cấy B. subtilis natto trong 2 mẫu, mỗi mẫu gồm 3 bình nón
chứa 100ml môi trường canh thang theo phần 2.3.1 c, ủ trong máy lắc với tốc độ 100v/p, ở hai điều kiện nhiệt độ 300C và 370C. Sau 24h lên men, đem li tâm môi trường (4.000vòng/20 phút) để thu riêng phần dịch trong hay dịch lên men. Tiếp theo, tách chiết protease từ dịch lên men bằng amoni sulfat 60% bão hòa thu được dịch chiết enzym theo phần 2.3.3. Thử và so sánh hoạt tính enzym của dịch lên men và dịch chiết enzym giữa các mẫu theo nguyên tắc khuếch tán trên thạch theo phần
Kết quả:
Bảng 3.5. Đường kính vịng phân giải casein (dcasein) của dịch lên men khi nuôi
cấy B. subtilis natto ở các nhiệt độ khác nhau
Nhiệt độ dcasein (mm) Lần 1 Lần 2 Lần 3 Trung bình ∆p (%) 300C 17,53 17,87 17,79 17,73 ± 0,18 0,45 370C 17,50 17,80 17,65 17,65 ± 0,15 0
Bảng 3.6. Đường kính vịng phân giải tinh bột (dtinh bột ) của dịch lên men khi nuôi cấy B. subtilis natto ở các nhiệt độ khác nhau
Nhiệt độ dtinh bột (mm) Lần 1 Lần 2 Lần 3 Trung bình ∆p (%) 300C 13,20 13,50 13,30 13,33 ± 0,15 6,22 370C 12,43 12,70 12,52 12,55 ± 0,14 0
Bảng 3.7. Đường kính vịng phân giải CMC (dCMC) của dịch lên men
khi nuôi cấy B. subtilis natto ở các nhiệt độ khác nhau
Nhiệt độ
dCMC (mm)
Lần 1 Lần 2 Lần 3 Trung bình ∆p (%)
300C 12,30 12,52 12,38 12,40 ± 0,11 4,73
370C 11,83 11,93 11,76 11,84 ± 0,09 0
Kết quả trung bình đường kính vịng phân giải các cơ chất của dịch lên men tại các nhiệt độ được thể hiện trên Hình 3.2
Hình 3.2. Ảnh hưởng của nhiệt độ ni cấy tới hoạt tính enzym ngoại bào trong dịch lên men
Kết quả đường kính vịng phân giải các cơ chất của dịch chiết enzym (dịch lên men sau tách chiết protease bằng amoni sulfat 60% bão hòa) sau khi lên men ở các nhiệt độ (300C, 370C) được thể hiện ở Bảng 3.8.
Bảng 3.8. Đường kính vịng phân giải cơ chất ( cơ chất) của dịch chiết enzym khi
nuôi cấy B. subtilis natto ở các nhiệt độ khác nhau
Cơ chất Nhiệt độ Casein Tinh bột CMC casein ∆p (%) tinh bột ∆p (%) CMC ∆p (%) 300C 23,57 ± 0,17 1,81 15,46 ± 0,20 7,81 15,43 ± 0,33 9,05 370C 23,15 ± 0,06 0 14,34 ± 0,20 0 14,15 ± 0,24 0 Nhận xét:
Hoạt độ các enzym protease, amylase, cellulase thể hiện qua đường kính vịng phân giải cơ chất casein, tinh bột, CMC. Từ số liệu về đường kính vịng phân giải các cơ chất của dịch lên men ở Bảng 3.5, Bảng 3.6, Bảng 3.7 nhận thấy: Khi
thay đổi nhiệt độ ni cấy B. subtilis natto (300
C và 370C) thì khả năng sinh enzym ngoại bào của vi khuẩn có thay đổi. Tuy nhiên, sự thay đổi là không giống nhau giữa các loại enzym.
0 5 10 15 20
Protease Amylase Cellulase