NGUYấN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.2.2.6.Xỏc định DE theo phương phỏp phõn tớch Lane Eynon
* Định nghĩa.
DE là số đương lượng đường khử quy ra glucoza được tạo thành trong quỏ trỡnh thủy phõn tinh bột tớnh theo phần trăm chất khụ.
* Mục đớch.
Trong quỏ trỡnh thủy phõn tinh bột, giỏ trị DE cho biết mức độ thủy phõn tinh bột thành đường khử.
* Cơ sở của phương phỏp.
Glucoza, maltoza và cỏc dextrin là cỏc loại đường khử vỡ trong phõn tử cú nhúm aldehyt. Trong mụi trường kiềm yếu đường khử dễ dàng khử ion Cu2+ thành Cu+ dưới dạng kết tủa CuO cú màu đỏ nõu. Để xỏc định DE phương phỏp naf sử dụng dung dịch Fehling A cú chứa Cu++ và dung dịch Fehling B cú chứa Natri Kalitatrat (KNaC4H4O6) trong mụi trường kiềm yếu. Vỡ thời gian phản ứng diễn ra rất nhanh (khoảng 2 phút) nờn trong dung dịch vẫn cũn dư Cu++. Hiện tượng này cú thể quan sỏt thấy nhờ khả năng tạo phức khụng màu của xanh metylen với dung dịch đường khử khi hết Cu++. Cụ thể là thờm hai ba giọt xanh metylen vào dung dịch phản ứng, khi vừa hết Cu++, đường khử sẽ tạo phức khụng màu với xanh metylen làm cho màu của dung dịch từ màu của xanh metylen chuyển thành màu trắng. Căn cứ vào đú ta kết thỳc quỏ trỡnh phản ứng.
Dựa vào số ml dung dịch đường khử tiờu hao đem tra bảng Eynon - Lane sẽ tớnh được đương lượng đường khử quy ra glucoza cần xỏc định. Lượng đường khử tớnh theo glucoza được tớnh theo phần trăm chất khụ gọi là DE.
Húa chất :
Dung dịch Fehling A: CuSO4.5H2O
Dung dịch Fehling B: KNaC4H4O6 + NaOH Chỉ thị xanh metylen: Xanh metylen tinh thể .
* Cỏch pha húa chất.
Dung dịch Fehling A: Cõn khoảng 70g CuSO4.5H2O hũa tan với nước cất rồi cho vào bỡnh định mức 1000ml, cho nước cất đến ngấn định mức. Để cho húa chất tan hoàn toàn, lọc.
Dung dịch Fehling A: Cõn 346g KNaC4H4O6 và 100g NaOH trộn lẫn với nhau, dựng nước cất hũa tan rồi chuyển vào bỡnh định mức 1000ml. Cho nước cất đến ngấn quy định, để qua ngày rồi lọc.
Chỉ thị xanh metylen: Cõn 1g xanh metylen hũa với nước cất rồi cho vào bỡnh định mức 100ml, để tan rồi lọc.
* Cỏch tiến hành.
Dung dịch đường được pha loóng sao cho sau khi pha loóng cú nồng độ đường khử phự hợp.
Dịch đường đó chuẩn bị ở trờn cho vào buret 50ml. Chuẩn bị ba bỡnh tam giỏc 250ml, hút vào mỗi bỡnh 5ml Fehling A và 5ml Fehling B. Sau đú cho vào bỡnh 15 - 20 ml dịch. Đun hỗn hợp cho đến khi sụi. Sau khi sụi 2 - 3 phút cho 2 - 3 giọt xanh metylen vào và tiếp tục định phõn bằng dung dịch đường đó pha loóng cho đến khi mất mầu chỉ thị (quỏ trỡnh đun sụi và định phõn khụng quỏ 3 phút) chuyển sang màu đỏ nõu. Kết thỳc quỏ trỡnh định phõn ta ghi lượng đường đó định phõn. Định phõn ba lần và lấy kết quả trung bỡnh. Căn cứ vào lượng dịch tiờu hao ta tra bảng Lane- Eynon để tớnh ra DE.
* Cỏch tớnh kết quả.
DE = (%) Trong đú:
A : Lượng đường khử tra từ bảng Lane- Eynon B : Tỷ lệ pha loóng
Bx : Nồng độ % chất khụ.