PHẦN 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.2.1.Tủa phân ựoạn enzyme chitosanase bằng muối amoni sunphate
để lựa chọn nồng ựộ muối thắch hợp nhất, ựem 100ml dịch enzyme thô ựược kết tủa phân ựoạn ở các nồng ựộ (NH4)2SO4 khác nhau: 0 Ờ 30, 30 Ờ 50, 50 - 70, 70 - 90% ựộ bão hoà. Quá trình kết tủa ựược thực hiện trong ựiều kiện lạnh (4oC), khuấy liên tục ựể muối tan nhanh. Sau khi ủ hỗn hợp muối - dịch enzyme trong 24 giờ (3 - 50C) nhận thấy có kết tủa bám vào phắa ựáy và thành của ống nghiệm. đem ly tâm lạnh thu phần kết tủa dạng dắnh như keo.
Kết tủa thu ựược sau mỗi phân ựoạn ựược hoà tan bằng một lượng dung dịch ựệm acetate pH = 5.5. Hoạt tắnh và hàm lượng của enzyme ựược ựo bằng các phương pháp ựã nêu ở trên. Kết quả thu ựược ựược trình bày ở bảng 4.5.
Bảng 4.5: Hoạt tắnh, hàm lượng protein và hoạt tắnh riêng của enzyme chitosanase ở các nồng ựộ muối khác nhau
Phân xuất (% ựộ bão hoà) Hoạt tắnh (U/l) Nồng ựộ protein (g/l) Hoạt tắnh riêng (U/g) 0 Ờ 30 145.9c 0.3869c 377.1c 30 Ờ 50 213.6b 0.4135b 516.5b 50 Ờ 70 271.6a 0.4713a 576.2a 70 Ờ 90 124.8d 0.3695d 337.7d
Nhìn vào bảng số liệu của bảng 4.5 nhận thấy ở nồng ựộ 0 - 30% (NH4)2SO4 vẫn thu ựược kết tủa nhưng hoạt tắnh của enzyme rất thấp (145.9 U/l) ựiều này chứng tỏ phân ựoạn này chỉ có các protein tạp chất bị kết tủa. Khi tăng dần nồng ựộ
muối, lượng protein Ờ enzyme kết tủa cũng tăng theo và ựến 70% ựộ bão hoà thì hoạt tắnh enzyme bắt ựầu giảm. Phần lớn enzyme thu ựược tập trung tại nồng ựộ từ 30 - 70%, ựặc biệt tại 50 - 70% ựộ bão hoà, giá trị hoạt tắnh và hoạt tắnh riêng của enzyme ựạt cực ựại (271.6 U/l; 576.2U/g). Do ựó lựa chọn phân ựoạn kết tủa 50 - 70% ựộ bão hoà cho các nghiên cứu tiếp theo.