PHẦN 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.1.4.Xác ựịnh ựường cong ựộng học sinh trưởng của vi khuẩn Bacillus licheniformis VKNN
chitosanase là:
Nhiệt ựộ: 41.70C
pH: 6.6
Nồng ựộ cơ chất chitosan: 0.2%
Khi ựó hoạt tắnh ựạt cực ựại 74.2 ổ 7.8 U/l
4.1.3. Kiểm tra mô hình
Tiến hành kiểm tra tắnh ựúng ựắn của mô hình bằng cách nuôi cấy vi khuẩn
Bacillus licheniformis VKNN1 trong ựiều kiện tối ưu 3 lần riêng biệt, kết quả thu ựược thể hiện ở bảng 4.4.
Bảng 4.4. Kết quả kiểm tra mô hình
Thắ nghiệm Nhiệt ựộ (0C) pH Nồng ựộ chitosan Hoạt tắnh chitosanase (U/l) 1 41.7 6.6 0.2 76.2 2 41.7 6.6 0.2 75.3 3 41.7 6.6 0.2 74.8
Kết quả kiểm tra mô hình cho thấy khi tiến hành nuôi cấy vi khuẩn Bacillus licheniformis VKNN1 trong ựiều kiện tối ưu, kết quả (76.2; 75.3 và 74.8 U/l) nằm trong khoảng giá trị lý thuyết của mô hình (74.2 ổ 7.8 U/l). Kết quả này cho phép khẳng ựịnh tắnh ựúng ựắn của mô hình.
4.1.4. Xác ựịnh ựường cong ựộng học sinh trưởng của vi khuẩn Bacillus licheniformis VKNN1 licheniformis VKNN1
Thực hiện thep phương pháp ựã nêu ở phần 3.3.1.4, vi khuẩn từ môi trường giữ giống ựược chuyển sang môi trường hoạt hóa, cứ 6h ựo ựộ hấp thụ quang ở bước sóng 620nm và xác ựịnh hoạt tắnh enzyme. Kết quả ựược trình bày trên hình 4.6.
Hình 4.6. đường cong sinh trưởng và hoạt tắnh chitosanase của vi khuẩn
Bacillus licheniformis VKNN1
Từ ựồ thị hình 4.6 ta thấy, từ 0 Ờ 12h ựầu nuôi cấy số lượng tế bào tăng lên rất chậm, ựây chắnh là thời gian tương ứng với pha mở ựầu (pha lag) trong quá trình sinh trưởng và phát triển của vi sinh vật. Từ 12 Ờ 36h, vi khuẩn sinh trưởng và phát triển nhanh chóng tương ứng với pha tăng trưởng (pha log), ựộ hấp thụ quang lúc này ựạt cao nhất 0.9485, nhưng sau ựó số lượng tế bào ựi vào ổn ựịnhvà có xu hướng giảm dần sau 78h nuôi cấy, giai ựoạn này ứng với pha ổn ựịnh và pha tử vong trong quá trình sinh trưởng và phát triển của vi sinh vật khi nuôi cấy trong hệ "kắn". Như vậy, dựa trên ựường cong sinh trưởng ta xác ựịnh ựược thời ựiểm tiếp giống tốt nhất là khoảng gần 36h của môi trường hoạt hóa hoặc nhân giống, trong giai ựoạn này số lượng tế bào lớn, các tế bào ở trạng thái ựộng học biểu hiện ựặc tắnh hình thái và sinh lý ựiển hình nhất, cho chất lượng giống tốt nhất. đồng thời với việc theo dõi ựộng thái sinh trưởng và phát triển của quần thể vi khuẩn, tiến hành xác ựịnh khả năng sinh tổng hợp chitosanase. Enzyme chitosanase là loại sản phẩm mà sự hình thành của nó gắn với sự sinh trưởng vi khuẩn, do vậy sự tổng hợp của nó thường xảy ra trong thời gian sinh trưởng và có thể tiếp diễn sau ựó. Sự tổng hợp chitosanase bắt ựầu trong pha lag và log, nhưng phải ựến giữa pha ổn ựịnh sự tổng hợp ựạt mức cao và sau ựó lại có xu hướng giảm sau 54h nuôi cấy.
điều này cũng tương tự như quá trình thu nhận chitosanase của vi khuẩn
Bacillus cereus TP 1224 [31].