Folin - Ciocalteau [69]
Định 1- ợng polyphenols tổng số của dịch chiết ban đầu theo ph- ơng phâp Folin-Ciocalteau. Ph- ơng phâp năy đ- ợc thực hiện dựa trín nguyín tắc câc hợp chất polyphenols trong dung dịch phản ứng với thuốc thử Folin - Ciocalteau cho sản phẩm mău xanh lam, đo độ hấp thụ ở b-ớc sóng 765 nm, lấy acid gallic lăm chất chuẩn.
- Cđn 10 mg mỗi loại cao vă hòa loêng trong 1 ml ethanol 90%
- Dung dịch Na2C03: 200g Na2C03 + 800ml II20 đun sôi, thím một văi tinh thể Na2C03, sau 24h đem lọc vă dẫn n- ớc cất tới 1000ml.
Tiến hănh:
a) Cho văo mỗi cóng định l-ợng 20ị~il mẫu thử + l,58ml H20 + 1 OOjLil thuốc thử Folin - Ciocalteau sau 30 giđy đến 8 phút cho thím 300ịLil Na2C03. Để hỗn hợp dung dịch trong 2h ở 20°c rồi xâc định ở b- ớc sóng 765nm. Tiến hănh định 1- ợng acid gallic để dựng đ- ờng chuẩn. Xđy dựng đ- ờng chuẩn với acid gallic nh- sau:
b) Cđn 0,5g (500mg) acid gallic + 10ml cồn tinh khiết 90% hoă tan hết, thím 90ml n-ớc cất, lắc đều sẽ đ-ợc dung dịch chuẩn gốc có nồng độ 5mg acid
c) Chuẩn bị cóng (ống nghiệm) vă cho văo đó số 1- ợng dung dịch gốc chuẩn lă 0, 1, 2, 3, 5 vă 10ml. Sau đó dẫn n-ớc cất đến 100ml sẽ thu đ-ợc câc nồngđộ ở câc ống nghiệm nh- sau: 0, 50, 100, 150, 250 vă 500 mg acid chuẩn gallic/1. Tiếp theo tiến hănh so mău theo h- ớng dẫn ở mục a) cùng với mẫu thử (mẫu thí nghiệm) ở đđy mẫu chuẩn lă 2ịi\ dung dịch chuẩn acid gallic.
Hình 2.1. Kết quả xđy dựng đồ thị chuẩn acid gallic: (kỉm theo bảng) S T T Gallic acid (mg/1) OD765 nin 1 0 0,009 2 50 0,062 3 100 0,119 4 150 0,168 5 250 0,265 6 500 0,519