sắc ký lỏng cao áp (HPLC)
2.3.4.1Định lượng dịch chiết tổng số
C2 = a
Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Thị Thu Hương Để xác định chính xác thành phần hóa học có trong mẫu dịch chiết tổng số cũng như hàm lượng Piperine có trong mẫu, chúng tôi tiến hành sắc ký lỏng cao áp HPLC với điều kiện:
Cột Hypersil Gold C18: 150 x 2.1 mm, 3 µm.
Pha động: MeOH : H2O (0.4% Formic axit) = 40 : 60. Chế độ chạy đồng đẳng.
Tốc độ dòng: 200 µl/phút. Đầu dò UV: scan 200 - 400 nm Lượng bơm mẫu: 25 µl.
Chất chuẩn Piperine được pha về các nồng độ 50 mg/l, 100 mg/l, 150 mg/l, 200 mg/l, 250 mg/l. Chạy các dung dịch chất chuẩn trong điều kiện nêu trên để xây dựng đường chuẩn, lập phương trình tuyến tính hồi quy thể hiện mối liên hệ giữa diện tích và nồng độ Piperine trong mẫu dịch chiết. Pha các mẫu cao khô tổng số trong methanol với nồng độ 0.1 mg/ml. Tiến hành HPLC với điều kiện như chất chuẩn, thu nhận sắc ký đồ và tính toán hàm lượng Piperine theo công thức 4 (CT4).
(CT4) Trong đó :
C3 là hàm lượng Piperine trong mẫu Hồ tiêu qua HPLC (%)
c là nồng độ Piperine có trong dịch chiết tổng số được định lượng qua HPLC (mg/ml).
C3= c x 10
Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Thị Thu Hương
10 là thể tích dung môi dùng để hòa tan toàn bộ lượng cao khô dịch chiết tổng số thu được.
5000 là khối lượng mẫu Hồ tiêu ban đầu (mg).
Dựa vào số liệu về lượng Piperine thu được qua sắc ký cột và hàm lượng Piperine định lượng được qua HPLC, hiệu suất tinh sạch thông qua sắc ký cột được tính theo công thức 5 (CT5).
(CT5) Trong đó:
H là hiệu suất sắc ký cột (%).
C2 là hàm lượng Piperine thu được qua sắc ký cột (%). C3 là hàm lượng Piperine thu được qua HPLC (%).