Để xác định sự có mặt của Piperine trong mẫu cao khô tổng số bằng TLC, chúng tôi tiến hành pha mẫu cao khô tổng số trong dung môi methanol với nồng độ 40 mg/ml. Chất chuẩn Piperine cũng được pha trong methanol nhưng với nồng độ thấp hơn là 1 mg/ml. Chúng tôi chuẩn bị các hệ dung môi với thành phần và tỷ lệ khác nhau nhằm tìm ra hệ dung môi phân tách tốt nhất các hợp chất có trong mẫu cao khô tổng số: ethanol : n - hexane : ethyl acetate ( tỷ lệ 5 : 3 : 2 và 3 : 5 : 2); n -
5 g bột mẫu khô
Nghiền nhỏ trong cối sứ
Bổ sung 100ml Methanol Bổ sung 100 ml Methanol
Siêu âm 10’ Siêu âm 30 phút
Khuấy từ 1 giờ Khuấy từ 30 phút
Ly tâm 6000 vòng/ phút trong 10 phút Ly tâm 6000 vòng/ phút trong 10 phút Cặn Dịch chiết Dịch chiết Cặn x2 x2 QUY TRÌNH 1 QUY TRÌNH 2 Dịch chiết
Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Thị Thu Hương hexane : ethyl acetate ( tỷ lệ 7 : 3, 8 : 2 và 9 : 1).
Chuẩn bị bản silicagel với kích thước 4 x 5cm, có đánh dấu vị trí chấm mẫu và vị trí kết thúc. Dùng ống mao quản chấm lần lượt các mẫu và chất chuẩn lên vị trí chấm mẫu, mỗi mẫu chấm 3 lần. Để khô bản silicagel rồi đưa vào bình chạy sắc ký đã bổ sung hệ dung môi. Tiến hành chạy đến khi dung môi dâng lên đến vị trí kết thúc đã đánh dấu thì lấy bản TLC ra, sấy nóng ở 100oC, quan sát dưới tia UV tại bước sóng 254 nm và 366 nm.
Tỷ lệ Rf của Piperine được tính theo công thức 2 (CT2).
(CT2) Trong đó:
l : khoảng cách từ điểm xuất phát đến tâm của vết mẫu thử, tính bằng cm.
lo : khoảng cách từ điểm xuất phát đến mức dung môi đo trên cùng đường đi của vết, tính bằng cm.
Rf: Chỉ có giá trị từ 0 đến l.