ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.2.1.Định lượng Lp-PLA2 huyết thanh
PLAC test ELISA là một xét nghiệm miễn dịch để định lượng nồng độ Lp - PLA2 trong huyết tương và huyết thanh người với chất chống đông EDTA trên hệ thống máy xét nghiệm miễn dịch tự động, có chế độ chạy cấp cứu, được thực hiện tại Khoa Sinh hóa Bệnh viện Trung ương Huế: [51], [59], [69], [70], [71], [73], [75], [80], [82], [83]
-Phương pháp: CMIA, Sandwich. -Đơn vị biểu thị: ng/mL.
-Loại mẫu bệnh phẩm: Huyết tương trong EDTA.
-Nguyên lý xét nghiệm: Sử dụng hai kháng thể đơn dòng đặc hiệu cao để đo trực tiếp nồng độ Lp -PLA2 trong huyết tương và huyết thanh người. Hệ thống xét nghiệm kháng thể đơn dòng sử dụng chống Lp-PLA2 (2C10). Mẫu được đưa thêm vào đĩa và ủ trong 10 phút ở 20 đến 260C. Một kháng thể đơn dòng thứ hai chống Lp-PLA2 kháng thể (4B4) có nhãn với enzyme horseradish peroxidase (HRP), sau đó được thêm vào và phản ứng với các kháng nguyên cố
định tại 20 đến 260C trong 180 phút, kết quả là các phân tử Lp-PLA2 bị bắt giữa các pha rắn và các enzyme kháng thể có gắn nhãn. Các giếng được rữa với một bộ đệm cung cấp để loại bỏ bất kỳ kháng nguyên không liên kết. Các chất nền, Tetramethylbenzidine (TMB) được thêm vào và ủ ở 20 đến 260C trong 20 phút, dẫn đến sự phát triển màu xanh. Màu sắc ngừng phát triển với việc bổ xung thêm dịch ngừng, chuyển đổi sang màu vàng. Việc hấp thụ các bánh enzyme bề mặt được xác định ở mức 450 nm và là tỷ lệ thuận với nồng độ hiện tại Lp- PLA2 [60], [70], [71], [73], [75], [80], [82], [83].
Một tập hợp các hiệu chuẩn Lp-PLA2 được sử dụng để vẽ một đường cong nhận dạng so với chuẩn của nồng độ Lp-PLA2 từ đó nồng độ Lp-PLA2 trong mẫu xét nghiệm có thể xác định.
Sơ đồ 2.1. Đường cong nhận dạng chuẩn [73], [82] Giá trị bình thường của Lp - PLA2 trong máu: 188 - 205 ng/mL:
Giá trị trung bình đối với nữ: 174 ng/mL
Giá trị trung bình đối với nam: 251 ng/mL
H ấp t h ụ (nh ận d ạng 450n m )
-Nồng độ Lp-PLA2 theo bản đồng thuận quốc gia Hoa Kỳ: 235ng/ml cao, tuy nhiên theo các đề xuất của các hãng xét nghiệm thì nồng độ < 200ng/ml là thấp, 200 - 235ng/ml là giới hạn cao và trên 235ng/ml là cao.
2.2.2.2. Điện tim
Sử dụng máy điện tim sáu cần bằng máy CARDIOFAX.V - 9320K của hãng Nihon - Kohden - Nhật Bản. Đo tại Khoa Tim mạch Bệnh viện Đại học Y Dược Huế và Bệnh viện Trung ương Huế. Trường hợp NMCT vào cấp cứu thì đo điện tim bằng máy một cần Cardiofax của hãng Nikohden sau đó ngày hôm sau đo kiểm tra lại bằng máy sáu cần.
Đo 12 chuyển đạo thông thường, nếu nghi ngờ nhồi máu ở thất phải hoặc vùng sau thì đo thêm V3R, V4R, V7, V8, V9 hoặc đo cao lên một khoảng liên sườn. Phân tích điện tim về nhịp, tần số, trục, các sóng. Đặt biệt chú ý đến các tiêu chuẩn chẩn đoán BMV và NMCT. [21], [24]