Gen biểu hiện asp1 đƣợc Genscript tổng hợp và đƣa vào vector pUC57 để
tạo thành vector pUC-asp1. Tuy nhiên, lƣợng vector mà công ty gửi về không đủ để thu gen chuyển vào vector biểu hiện nên chúng tôi đã tiến hành biến nạp plasmid pUC-asp1 vào tế bào E. coli DH10b để nhân dòng gen, đồng thời kiểm tra lại gen bằng enzyme hạn chế trƣớc khi chuyển vào vector biểu hiện.
Vector pUC57 là vector có kích thƣớc nhỏ (2710 bp) so với các vector tách dòng thế hệ trƣớc, phù hợp với mục đích tách dòng: chứa gen bla mã hóa β- lactamase kháng ampicillin giúp cho quá trình chọn lọc các tế bào mang plasmid chứa gen ngoại lai; có vùng đa nối thuận lợi cho việc ghép nối các đoạn ADN ngoại lai. Kết quả là chỉ tế bào vi khuẩn mang plasmid tái tổ hợp mới có khả năng mọc trên môi trƣờng nuôi cấy và tạo thành khuẩn lạc. Sau khi biến nạp vào tế bào E. coli DH10b, ba dòng tế bào đã đƣợc chọn để tách plasmid và kiểm tra plasmid bằng các enzyme hạn chế.
44
Theo tính toán lý thuyết plasmid tái tổ hợp pUC-asp1 có kích thƣớc khoảng 3,8 kb, dài hơn so với plasmid gốc (2,7 kb), nên sẽ di chuyển chậm hơn khi chạy điện di trên gel agarose, dẫn tới sẽ nằm ở vị trí cao hơn so với chủng đối chứng pUC57 trên bản điện di (Hình 14).
Hình 14. Phân tích các dòng plasmid pUC-asp1 trên gel điện di agarose 1%. 1, 2, 3:
plasmid pUC57 mang gen asp1 đƣợc tách từ các dòng E. coli tái tổ hợp tƣơng ứng.
pUC57: vector pUC57 không mang gen đƣợc dùng làm đối chứng