Cùng với việc đánh giá lƣợng BCG sử dụng trong nghiên cứu, chúng tôi cũng tiến hành tối ƣu thời gian phản ứng gắn kết giữa hạt nano từ với kháng thể thông qua cầu nối EDC với các khoảng thời gian 15 phút, 30 phút và 60 phút áp dụng cho cả 5 nồng độ BCG sử dụng.
Hình 3.6. Tối ƣu hóa thời gian phản ứng gắn kết giữa hạt nano – EDC - kháng thể kháng lao
Giếng (-) : Đối chứng âm, Giếng M : Thang chuẩn ADN 100 bp và đối chứng dương.
Giếng 1, 2, 3, 4, 5 : Thời gian ủ phức hạt 15 phút lần lượt với các mẫu không pha loãng, pha loãng 5, 25, 125 và 625 lần.
Giếng 6,7,8,9,10 : Thời gian ủ phức hạt 30 phút lần lượt với các mẫu không pha loãng, pha loãng 5, 25, 125 và 625 lần.
Giếng 11, 12, 13, 14, 15 : Thời gian ủ phức hạt 60 phút lần lượt với các mẫu không pha loãng, pha loãng 5, 25, 125 và 625 lần.
Khoa Sinh học Khóa 2010 - 2012
Kết quả điện di ở hình 3.6 cho thấy tại tất cả các thời gian ủ đều xuất hiện băng ADN kích thƣớc 249 bp giống nhƣ đối chứng dƣơng, tuy nhiên có sự khác nhau rất lớn khi sử dụng nồng độ BCG khác nhau tại mỗi thời gian ủ. Tại thời gian ủ 15 hay 60 phút thì chỉ ở nồng độ BCG không pha loãng mới cho băng ADN xuất hiện rõ, còn ở các nồng độ pha loãng thấp hơn thì không xuất hiện hoặc có xuất hiện nhƣng rất mờ. Trong khi đó tại thời gian ủ 30 phút, sự xuất hiện băng là rất rõ nét giảm dần từ nồng độ không pha loãng tới pha loãng 25 lần, phù hợp với kết quả đánh giá nồng độ BCG sử dụng ở trên.
Từ kết quả trên cho chúng tôi kết luận thời gian ủ phức hệ hạt nano từ - đệm gắn kết – EDC – kháng thể kháng lao 30 phút mà chúng tôi áp dụng cho các quy trình trên đã là tối ƣu, và đây là thời gian hợp lý nhất để phức hệ hạt nano từ và kháng thể kháng lao gắn kết đạt hiệu quả cao nhất.