Fragmet-scFv)
Kỹ thuật phage display ra đời vào năm 1985 bởi Smith và các cộng sự [53] và
đã trở thành một trong những kỹ thuật được nghiên cứu cũng như ứng dụng triển khai
mạnh mẽ. Đoạn ADN mã hóa cho mảnh scFv được tạo ra bằng kỹ thuật này và chứa trong thư viện phage display. Kháng thể tái tổ hợp được tạo ra theo phương pháp này
có thể dễ dàng và nhanh chóng phát triển ở một tiêu chuẩn cao và được tạo ra mà không cần phải có sự tham gia của hệ thống miễn dịch.
ScFv là sự kết hợp của những vùng khác nhau của chuỗi nặng và chuỗi nhẹ của
IgG thông qua một cầu nối ngắn, thường là serine hoặc glycine. Để tạo ra scFv trong thư viện phage display về nguyên tắc thì cơ bản giống với phương pháp tạo ra các
kháng thể tái tổ hợp khác trong thư viện. Các gen mã hóa cho chuỗi nặng và chuỗi nhẹ
sẽ được lấy ra từ tế bào lympho B thông qua quá trình sao chép ngược. Khuếch đại các đoạn gen mã hóa chuỗi nặng và chuỗi nhẹ bằng phiên mã ngược và PCR. Cắt sản phẩm
PCR bằng enzim giới hạn và tách dòng gen đó ra. Sau đó gắn vào một gen đơn sử dụng
một mảnh ADN nối. Mảnh ADN scFv lắp ráp này sẽ được cài vào trong một vector
phagemid và phagemid tái tổ hợp này sẽ được biến nạp vào tế bào khả biến E. coli
thông qua phương pháp biến nạp bằng sốc nhiệt hay xung điện.
Hiện nay đã có nhiều nhà khoa học nghiên cứu về scFv và phạm vi ứng dụng
của nó ngày càng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực: sinh học, y học. Do mới ra đời nên những nghiên cứu về ứng dụng của scFv vẫn chưa được nghiên cứu nhiều nhưng
những ứng dụng của scFv là khá quan trọng vì vậy nghiên cứu scFv giúp chúng ta tạo ra được kháng thể đơn dòng cho phép sử dụng trực tiếp trong việc điều trị bệnh và chẩn đoán bệnh.
Hình 1.13. Sơ đồ tạo scFv