Nguyên tắc chung cho pH tối ưu có thể gắn với hiệu suất cao nhất dựa trên
điểm đẳng điện PI của loại kháng thể đó. Các hạt AuNPs sẽ gắn một cách hiệu quả
với protein khi pH của dung dịch gần với điểm đẳng điện PI của protein đó (ví dụ
protein A có pH 5.1). Khi ở pH cao hơn, hiệu suất gắn sẽ cao hơn nhưng điều này sẽ
làm biến tính protein và làm cho phản ứng đặc hiệu trở nên kém và có thể mất tính đặc hiệu của kháng thể gắn lên hạt vàng.
Một điểm cần lưu ý nữa là khi có quá nhiều protein gắn lên bề mặt hạt AuNPs
sẽ là một bất lợi: một số protein liên kết yếu có thể tách khỏi bề mặt hạt nano. Điều
này sẽ làm các hạt có gắn protein trở nên kém hiệu quả vì các protein tự do sẽ cạnh
tranh với các miền gắn trên hạt nano[17].
Các hạt keo vàng kích thước nano métđược tổng hợp theo quy trình trên tồn tại ở dạng huyền phù bởi lực đẩy tĩnh điện lẫn nhau được sinh ra và duy trì bởi bởi mạng lưới điện tích dương được tính trên bề mặt của chúng. Các cation tồn tại trong dung
dịch muối chống lại lực đẩy tĩnh điện và khiến cho các “hạt nano trần” này co cụm và cuối cùng là kết tủa khỏi dung dịch huyền phù. Việc gắn kết với protein hoặc các tác
nhân làm bền khác với bề mặt hạt nano tồn tại trong trạng thái sol bằng việc ngăn cản
việc kết tủa bởi muối trên hạt AuNPs. Việc gắn kết protein với AuNPs phụ thuộc vào
độ pH của dung dịch nano và dung dịch protein.
Để tìm ra pH tối ưu cho việc gắn kháng thể lên AuNPs, chúng tôi đã tiến hành quy trình sau:
Bước 1: Chuẩn bị 7 ống effpendof chứa 1 ml dung dịch nano vàng, sau đó các dung dịch được chỉnh pH bằng giấy quỳ tím thay đổi từ pH 5 tới pH 11bằng NaOH1N.
Bước 2: Kháng thểkháng virus cúm A/H5N1 được pha loãng tới nồng độ 100µg/ml bằng dung dịch PBS 1x pH 7.4.
Bước 3: 100 µl dung dịch PBS chứa kháng thể (100µg/ml) được nhỏ lần lượt vào 7 thể tích dung dịch AuNPs nói trên sau khi chỉnh pH. Đảo nhẹ và ủ ở nhiệt độ phòng trong 15 phút.
Bước 4: Tiếp theo, nhỏ thêm vào mỗi ống 100 µl NaCl 10% để kích thích các hạt
nano co cụm với nhau. pH tối ưu nhất cho phản ứng gắn là tại pH cho phép kháng thể
gắn với bề mặt hạt nano vàng để ngăn cản sự hình thành kết tủa bởi muối.