Khả năng kháng khuẩn của các chủng vi khuẩn lactic đã tuyển chọn được xác định bằng phương pháp quan sát vòng kháng khuẩn, phương pháp này cũng có nguyên tắc và tiến hành tương tự như phương pháp xác định hoạt tính amylase. Nhưng môi trường thạch để đục lỗ là môi trường thạch thường có chứa sinh khối của vi khuẩn kiểm định.
Nguyên tắc: Trong quá trình nuôi cấy lắc vi khuẩn lactic, tế bào vi khuẩn
sẽ tiết ra môi trường các loại enzyme, chất kháng sinh, kháng khuẩn. Thu lấy dịch nuôi này thử trên môi trường thạch có chứa vi khuẩn kiểm định, nếu trong dịch nuụi cú hoạt chất kháng khuẩn nó sẽ gây ức chế sự phát triển của vi khuẩn kiểm định xung quanh lỗ thạch, tạo vòng trong suốt, không thấy sự xuất hiện của vi khuẩn kiểm định gọi là vòng kháng khuẩn.
Tiến hành:
− Chủng vi khuẩn lactic có hoạt tính amylase đã được tuyển chọn đem nuôi cấy lắc ổn nhiệt với tốc độ lắc 220 vũng/phỳt, ở 37OC trong 48 giờ.
− Li tâm dịch nuôi cấy đó với tốc độ 12000 vũng/phỳt trong 10 phút, thu lấy dịch trong.
− Các loại vi khuẩn kiểm định cũng được nuôi cấy lắc trong môi trường thạch thường dịch thể với tốc độ lắc 220 vũng/phỳt, ở 37OC trong 48 giờ.
− Môi trường thạch thường ở thể đặc đem đun tan, để nguội đến khoảng 400C, bổ sung 0,5 ml dịch nuôi lắc vi khuẩn kiểm định, lắc nhẹ cho vi khuẩn kiểm định phân tán đều với môi trường thạch.
− Đổ thạch vào đĩa Petri, để nguội và khô.
− Đục lỗ thạch bằng ống nhựa đã khử trùng.
− Nhỏ dịch li tâm nuôi cấy vi khuẩn lactic vào lỗ thạch vừa đục. Chuyển sang tủ ấm 37OC, sau 24h thì đem ra quan sát vòng kháng khuẩn.
Hoạt tính kháng khuẩn được xác định bằng đường kính vòng kháng khuẩn, bằng D – d = K (mm).