- Tiến hành pha Skoog I, II và III của mơi trường MS Pha stock vitamin Morel, glycin và inosytol
1.3.Phương pháp tiến hành:
TÁCH ĐƯỜNG KHỬ TRONG LỊNG TRẮNG TRỨNG BẰNG NẤM MEN
1.3.Phương pháp tiến hành:
Tách đường khử cĩ lịng trắng trứng bằng nấm men S.cerevisiae là phương pháp sinh học được thực hiện theo các bước sau:
* Bước 1: Chuẩn bị men giống
Nấm men giống được chuẩn bị từ các nguồn (hoặc từ ngân hàng giống vi sinh vật trong và ngồi nước hoặc từ các phịng thí nghiệm vi sinh vật hoặc cĩ thể phân lập từ các sản phẩm thực phẩm lên men cĩ sử dụng S.cerevisiae
trên các mơi trường thích hợp). Nấm men giống được bảo quản trong các mơi trường giữ giống ở nhiệt độ < 40C. Trước khi sử dụng, nấm men được hoạt hố và tăng sinh khối trên mơi trường thích hợp.
nấm men S.cerevisiae
55
* Bước 2: Chuẩn bị lịng trắng trứng
Dùng trứng tươi (trứng gà, vịt, ngan, ngỗng, đà điểu) cĩ thời gian bảo quản thích hợp để 2 phần lịng đỏ, lịng trắng trứng chưa bị trộn lẫn với nhau
đảm bảo tách riêng được lịng trắng để tiến hành lên men tách đường khử. Số
lượng trứng từ 3 - 5 quả cho mỗi nhĩm (riêng trứng đà điểu chỉ cần 1 quả). Trứng được rửa sạch, sát trùng bằng dung dịch muối lỗng (3 – 5 %) hoặc clorin 5mg/lít, lau khơ bằng giấy thấm sạch. Dùng bát sứ hoặc chén thuỷ tinh
đã rửa sạch, lau khơ, sấy thanh trùng. Đập bể đơi trứng, tách riêng lịng đỏ, lịng trắng vào các dụng cụ riêng. Bảo quản ở nhiệt độ < 4 0C (nếu chưa tiến hành lên men ngay). Điều chỉnh pH của lịng trắng trứng đến giá trị bằng axit xitric dung dịch 30%.
* Bước 3: Lên men lịng trắng trứng - Dùng sinh khối nấm men theo tỉ lệ
100025 25 , 1 trung trang long men nam = (kg) hoặc 1000 3 ,
1 (kg) trộn đều vào khối lịng trắng. Thời gian kết thúc lên men tách đường
khử kéo dài khoảng từ 8 - 12 giờ ở nhiệt độ phịng xác định sự biến thiên hàm lượng đường theo thời gian lên men (trước khi cấy sinh khối nấm men và cách 2 giờ xác định đường một lần) trong khoảng thời gian lên men dự kiến bằng phương pháp Nelson. Kết quả được biểu diễn trên hệ trục toạ độ hoặc profil biểu đồ. Nhận xét sự chuyển hố đường theo từng giai đoạn xác định.
- Nguyên tắc phương pháp Nelson: Cho dung dịch Cu+2 vào dung dịch chứa đường khử cần phân tích. Đun sơi trong khoảng thời gian nhất định thì Cu+2 sẽ tác dụng với nhĩm CHO của đường khử tạo thành kết tủa Cu2O màu
đỏ gạch. Hồ tan kết tủa này bằng dung dịch arseno - molypden được dung dịch màu xanh. Tuỳ theo hàm lượng đường khử sẽ tương ứng với lượng kết tủa Cu2O tạo thành và dung dịch cĩ cường độ màu thích hợp. Tiến hành so màu ở bước sĩng λ = 660 nm, dùng đường chuẩn glucoza để xác định đường khử cĩ trong mẫu phân tích.
1.4. Nguyên liệu, dụng cụ, hố chất: - Nguyên liệu: + Trứng gia cầm tươi