- Dtmg tia cue tim + K2S2OX de oxi hda mau [127]
V; Trong do:
3.3.3. Xiiy dung quy trinh plian ticli lugng vet lugng idt trong huyet thanh
Idl irong huyet Ihanii (serum) tdn lai d hai diing: idl vo c0 (1) va idl huu cọ Diing idl iiuu cd trong huyet thanh con dugc goi la idl gfin prolein (prolein bound iodine-PBl). Idt huu co biio gdm hocmon T4 (tetraiodolhyronine) va T^ (triiodothyronine) va mot lugng ritl nhd iodotyrosin (idl phi noi liel). lot huu ca va idl vo CO irong huyet thanh ngudi cd gia tri sinh hoc rieng biet. lot trong huyet thiinh iii mot chi lieu sinh hgc quan trong nhfim giup lam sang chan doiin cac trudng hgp suy giiip hoac bi cudng giap do idt [38], [61]. Mat khiic, theo lac gia [8], hiim lugng idt trong huyet thanh d cudng rdn tie sa sinh cQng la mot chi lieu
de kiem soiil wh diinh giii hieu quii ciia chuang trinh phii mudi idt d cong đng, do
đ viec nghien ciiu xiic dinli lugng vet idt trong huyet thanh la can thiet.
• Phan huy ni^u huyet thanh
Cd Ihe phan hiiy milu iiuyel ihanli biing phuang phiip vo ca hda udl vdi dung dich HCIO3 + Na2Cr04, d nhiel do 160"C trong 2 gid, hoac bang phuang phcip tro hda trong moi trudng ki6m va nung d 600"C. Sau nhieu liin philn hiiy mSu huyet thanh bfmg hai kl lluult tren, chiing toi thil'y, philn hiiy milu bfmg kT thuat Iro hda trong moi trudng kiem cd do lap lai va do thu hdi cao han kl thuat ph^n hiiy milu bfuig vo ca hda udl. Vi the de Xiic dinh idt Irong huyet thanh cluing toi chon kl thuilt philn luiy mfiu trong moi trudng kiem d va nung nhiet do 600"C [43], [97], [130]
Chung loi Xiic dinh idl trong huycl ihanh d hai diing: long ham lugng idl trong huycl thanh vii idl gfin prolein (PBI). I liim lugng idl vo ca dugc linh nhu Siiu: Idl v6 ca (!') bfmg (long idl-huyel thanh) Irir (idl d diing PBI).
* Chuan bj mfiu huyet thanh de Xiic dinh idl d dang PBỊ Lay vao dng li tam siich (cd Uilp dily) 1ml huyet liuinh, them 7ml nude cÁl vii 1ml ZnS04 10% dung dua ihiiy linh Iron deu, them 1ml K2C0.^ 30%, tiep luc Iron deu; de yen 5 phut rdi li liim (2500 vdng/phiit), trong 10 phut. Loai bd djch trong dng, lay ket liia protein. Loai bd idt vo ca (Í) trong ket liia bfmg each rua kel tiia protein ba lan bfmg nude cil't (mdi liin rua them 10ml nude cat dung dua thiiy linh quay deu ket lua, li Ulm Vil loai bd dich rúii). Tien hanh đng thdi 3 mfiu trdng (thuc iiicn Ciic
giai doan nhu tren)
^'^ Tien lumh plum hiiy nuiu dc Xiic dinh long hiun lugng idl trong huyet lluuih. Liíy Viio chen sií (loai cd dung lich klioiing 30 ml, cd nfip day) 1ml huyet thanh, them
1ml ZnSÔ 10%,va Iml K2CO,.30% . Siiy kho chen d I 0 5 ' t trong 8 gid. Dua chen vao Id, nung d 300"C trong 30 phiit, iiilng nhiet do Id len 600"C, nung tiep trong 2-3 gid. Trong quii trinh nung thinh ihoiing md ciia Id d^ tang cudng oxị LÁy chen ra klidi Id, them Iml ZnS04 10%,va Iml KjCÔ 30%, rdi lap lai mot liin nua qua trinh say va nung nhu tren. Neu tro trong chen cdn den, them khoang (0,lml ZnS04 10%,Vii 0,1ml K2CO3 30%), liep tuc nung miu cho den khi dat dugc tro miiu tr^ng hoac Xiim. Them 5ml nude Ciil, dun nhe de hda lan mfiu, li tdm 2500 vdng/phiil, trong 10 phiit, chuyen dich trong vao binh dinh miic 10ml. Dung dung dich H2S04 2,5M d^ trung hda dung dich den pH bfmg 6,5-7, dinh miic dung djch da trung hda
thanhlOml, liíy dich trong 66 dinh lugng idl.
* Philn hiiy mSu de xac djnh idt d diing PBỊ Chuyen kel tiia cd chua idt d diing PBI (da loai Irií idl vo ca trong nuiu nhu da md la d tren) vao chen nung, them
Iml K2CO3 30% .Thuc hien qua trinh say, nung, va hda tan mSu nhu trong phan xac dinh long ham lugng idl.
^^ Do ndng do I". Cho vao dng nghiem Vml dung dich (mfiu do, mau trdng, mfiu chuan idt), lugng mfiu lily the uiio de cd ndng do I" cudi trong dng 2, 4, 6, 8, 12, 15 ng/ml).. Them 1ml H2SO4 1,25M + 1ml As(lll) 0,05M. Dal ciic dng va dung dich Ce(IV) Viio miiy dieu nhiel d 40"C trong 10 phiil; sau đ them 0,3ml Ce(IV) 0,075M;
iron deu ong. Dat Ciic dng vao may dieu nhiel d 40 ± I ' t trong 20 phiit. Dung 20 phiil sau kill them Ce(IV), do do hiíp thu dung dich Ce(IV) d budc sdng X = 420 nm.
Dung đ Ihi chuan tren giil'y dii, ham lugng idt Irong mfiu dugc tfnh theo cong thuc sau:
V 1
X(ngr I ml) = w*-^* — \ trong đ:
w : Lugug idt trong milu lim dugc tuđ thi chudn hoac phuang trinh dudng chudn V,: The tich mau khi hda lan (ml). V2: The tfch mfiu lay de phan tich (ml)
• Quy Irhili xac dinh idl Irung huyet thanh
Quy lihih Xiic dinh lugng vet idl trong huyet lluinh dugc idm tdt irong sa đ bi6u dien tren hinh 3.15
Xiic cijnii ham luuug PBI Uong semni: Iml seium + 7ml H2O + Iml ZnS0410% + 1ml KjCỌ, 30%, iron
d^u Vii giú yen 5 pliiil
I
Li Ulm (2500v6iig/phul) /lO phiit, Iron deu kel lua prolein. Li tam de riia ket liia prolein (ba lan)
Chuyen ket liia prolein vao chensưImIK2CO,30%
Do do hap thu a X =
420nm, ve do ihi chudn va ifnh kel qua
Xcic dinh long ham lugnglV serum: 1ml serum + 1ml ZnSO4l0% + Iml KjCO, 30%, Iron deu
ị
Say klio 0 I05"C Irong 8 gid Nung I: 300'C/30 phut. Nung II : 600"C /2 gid, (doi v6i long
ham l\xmg r lap lai 2 liin nung).
Di nguoi
Them 5 ml H2Ọ Dun nhe 6i hoa lan
milụ Li lam (2500 vong phut)/10 pluit Them H2SO4 2,5 M đ dung djch co pH 6,5-7, dinh muc dung dich dung lOml
1ml dich loc + 1ml H2SO4 1,25M + Iml
As(III) 0,05M. Dieu nhiet a 40"C/10 phiil +
0,3ml Ce(IV) 0,075M (cQng da dieu nhiet d 40"C).Tiep luc dieu nhiet d 40"C/20 phiit
/////// 3.15. Sađ bieu diSii qui trinh pluin tfch lugng vet idl trong huyet thanh
3.3.3.L Diinh gia do tin cay cua qui trinh philn tich lugng vet idt trong huyet thanh
='= Xdc dinh dp thu hdị Lily ba milu huyet thanh (long ham lugng idt trong
Ciic nuiu iiiiy da Xiic dinh bfmg phuang pluip them chudn). Them mgl lugng idl chuan viio 3 nuiu huyet thanh iiiiỵ Tien hiinh philn huy mau va Xiic djnh long ham lugng idl nhu d muc "phan huy mdu huyet thanh". Kel qua thu dugc d bang 3.53.
•'^ Xdc dinh do chinh xdc vd dt} tap lai.
Them mgl lugng idt chudn vao mdu huy6't thanh A (da xac dinh ham lugng trong mdu A bang phuang phiip ihcm chudn) siio cho hiun lugng idl trong mau huyet thanh A liing len 1,5 lan; xem dily la mdu huyet thanh chudn
(ASTD)- "Tien hiinh 5 phep xiic dinh song song tdng ham lugng idl trong mdu huyet Ihanh chudn. Kel qua thu dugc d bang 3.54.
Bdng 3.53. Ket qua khao Siil do thu hdi (idt trong huyet thanh)
Miim lugng r Irong huycl Ihanh M, ( 5 6 n g I 7 m l )
M2 (85 ng I/ml) M^(124ngI7ml)
Lugng idt them Viio mdu 40 ng 17ml 40 ng I/ml 40 ng r/ml Do thu hdi 84% 92% 107% Sd lieu thu dugc d bang 3.53 cho thiiy qui trinh phan lich cd do thu hdi klia cao
Bdng 3.54. Ket qua xac dinh ham lugng idt trong mdu huyet thanh chudn
Mdu huyet chudn AsTD ± SD
AsTD — ^STD
Hiim lugng I" irong mdu chuan (ng/ml)
105,7 ± 4,6 105,7 ± 5 , 7 105,7 ± 5 , 7
Ham lugng 1" xiic dinh dugc (ng/ml)
111,4 + 3,2 111,4 ± 4 , 0 111,4 ± 4 , 0
Sai sd (%) + 5,4
SD: dp lech chudn ciia cdc gid tri rieng le(n = 5). esip: bien gidi tin cdy 95% Tu kel qua thu dugc d bang 3.54 cho lluiy phuang phap xac dinh dat dugc
do chfnh Xiic va do lap lai khii tdt (he sd bien dong CV < 10%)
''= So sdnh kei qua xdc dinh hdm litpng idt d dang PBI bdng phuong phdp
DHXT vd xdc dinh hdm lúp'ng idt đang tdng (Tj + 7 J bdng phuong phdp RIẠ
De khao sat do chfnh Xiic ciia qui trinh phAn tich, chung toi lien hanh Xiic djnh ham lugng idt d dang PBI trong 10 mdu huyet ihanh bdng phuang phiip DHXT Vil Xiic djnh hiim lugng idl d dang long (T3 + T4) bdng phuang phiip RIẠ Ket qufi thu dugc d biing 3.55.
Bdng 3,55. Ket qua xiic djnh ham lugng idt d dang PBI bdng phuang pluip DHXT
(I) Vil Xiic dinh xac djnh hiim lugng idl d dixng tdng T3 va T4 phuang phap RIA**** (2) Mau Ml M2 M3 M4 M5 M, M7 Ms My M|„
Ham luong FBI**' (ng/ml) X(l) 115,2 102,5 108,7 97,6 73,4 123,5 88,7 . 83,2 91,6 66,8 CV 9,3 7,8 5,4 7,3 4,7 5,2 6,6 7,2 8,3 6,7
Ham luang long'** T3 va T4 (ng/ml) X(2) 110,4 95,6 100,8 90,4 68,7 117,6 82,5 78,8 84,9 62,3 CV 4,7 6,4 7,5 5,2 5,9 6,7 6,3 3,8 4,9 4,4
(*) Gid tri trung binh ba lan xdc dinh tren mot mdu
(•^•*): Phuang phdp RIA diioc tien hanh tai Khoa Y hgc Hal nhdn Benh vien Trung Úovg Hue, vai cdc thong so: thdi gian Idc vd u ong: 2 gid; thdi gian do hoat do phdng xg: 30 gidỵ Su dung thuoc thii cua hang CIS bio international (Phdp) san xud't. Detectodo hoat tinh phong xg: yphokehai kenh Oakfield.
Nlur plutn Ireii da lilnh bay, vi liam luong iol trong PBI ngoai luong iot o dang tdng T, va T4 con co them mot luong rat nho lot 6 dang iodotyrosin, do vay ket qua plian tich ham luong iol 6 dang PBI bfmg phuong phap DHXT do chung toi thuc hien cao hon mot it so vdi két qua phan tich ham lugng iot o dang tdng T, va T4 bfmg phuang phap RIẠ Ket qua nay cung khang dinh rang viec xac djnh iol trong huyet thanh bang phuong phap DHXT hoan loan cháp nhan dugc.