* Xác ựịnh ựịnh tắnh
Sử dụng phương pháp phổ hồng ngoại.
- Lắc một lượng bột viên ựã nghiền mịn tương ứng khoảng 0,40g ibuprofen với 15mL axeton, lọc và ựể bay hơi dịch lọc tự nhiên tới khô. Phổ hồng ngoại của cắn thu ựược phải phù hợp với phổ hồng ngoại của ibuprofen chuẩn.
- Cắn thu ựược ở trên, sau khi kết tinh lại với ete, dầu hỏa (có khoảng sôi từ 40 ựến 600C), có nhiệt ựộ nóng chảy khoảng 75 Ờ 780C.
- Trong phần ựịnh lượng pic chắnh trên sắc ký ựồ của dung dịch thử phải có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu của pic ibuprofen trên sắc ký ựồ của dung dịch chuẩn.
Môi trường hòa tan: 900 mL dung dịch ựệm photphat pH = 7,2, ựược chuẩn bị bằng cách trộn 250 mL dung dịch kali dihydrophotphat 0,2M với 175 mL dung dịch natri hydroxyt 0,2M, thêm nước vừa ựủ 1000 mL.
Tốc ựộ quay: 50 vòng/phút Thời gian: 60 phút
Tiến hành: Lấy một phần dung dịch môi trường sau khi hòa tan, lọc, bỏ dịch lọc ựầụ Pha loãng dịch lọc với môi trường hòa tan ựể có nồng ựộ thắch hợp và ựo ựộ hấp thụ của dung dịch thu ựược ở bước sóng 221 nm.
Tắnh hàm lượng ibuprofen (C13H18O2) ựã hòa tan tắnh theo A (1%, 1 cm). Lấy 449 là giá trị A (1%, 1 cm) ở bước sóng cực ựại 221 nm.
Yêu cầu: Không ắt hơn 85% lượng ibuprofen so với lượng ghi trên nhãn ựược hòa tan trong 60 phút.
Phương pháp sắc ký lớp mỏng Bản mỏng: Silica gel GF254.
Dung môi triển khai: n-Hexan Ờ etyl axetat Ờ axit axetic băng (75 : 25 : 5). Dung dịch 1: Chiết một lượng bột viên tương ứng khoảng 0,250g ibuprofen với cloroform, chiết 3 lần, mỗi lần 10 mL cloroform, bay hơi dịch chiết còn khoảng 1 mL, thêm cloroform cho vừa ựủ 5 mL.
Dung dịch 2: Pha loãng 1,0 mL dung dịch 1 thành 100 mL với cloroform, lắc ựềụ
Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng 5 ộL mỗi dung dịch trên. Sau khi triển khai sắc ký, ựể khô bản mỏng ngoài không khắ, quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254 nm. Bất kỳ vết phụ nào trên sắc ký ựồ của dung dịch 1 không ựược ựậm hơn vết chắnh trên sắc ký ựồ của dung dịch 2. [2], [3], [22].
* Xác ựịnh ựịnh lượng
Phương pháp sắc ký lỏng
Pha ựộng: Hỗn hợp gồm 60 thể tắch dung dịch axit photphoric 0,01M và 40 thể tắch axetonitril.
Dung dịch chuẩn: Cân chắnh xác khoảng 100mg ibuprofen chuẩn hòa tan trong pha ựộng thành 50mL, trộn ựều, lọc qua màng lọc 0,45mm (hoặc ly tâm 25mL dung dịch ở tốc ựộ 2500 vòng/phút trong 5 phút và sử dụng dung dịch lỏng trong ở lớp trên).
Dung dịch thử: Cân 20 viên ựã ựược loại bỏ lớp bao, tắnh khối lượng trung bình của viên, nghiền thành bột mịn. Cân chắnh xác một lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,2g ibuprofen, thêm 60mL pha ựộng, lắc trong 20 phút, thêm pha ựộng vừa ựủ 100mL và trộn ựềụ
Lọc qua màng lọc 0,45mm điều kiện sắc ký:
- Cột thép không gỉ (25 cm x 4,6 mm) ựược nhồi pha tĩnh C (5 ộm hoặc 10 ộm) - Detector quang phổ tử ngoại ựặt ở bước sóng 224 nm.
- Tốc ựộ dòng: 1.5 mL/phút. - Thể tắch tiêm: 20 ộL.
Cách tiến hành: Kiểm tra khả năng thắch hợp của hệ thống sắc ký. Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩn. độ lệch chuẩn tương ựối của các diện tắch ựáp ứng từ 6 lần tiêm lặp lại không ựược lớn 2%. Tiến hành sắc ký lần lượt với dung dịch chuẩn và dung dịch thử. Tắnh hàm lượng ibuprofen C13H18O2 dựa vào diện tắch pic trên sắc ký ựồ của dung dịch chuẩn, dung dịch thử và hàm lượng C13H18O2 trong ibuprofen chuẩn.[18], [22].