3. Nội dung nghiên cứu
2.3.4.Phƣơng pháp tiến hành phản ứng ngƣng kết nhanh trên phiến kính (xác định type
định type huyết thanh)
- Chuẩn bị:
+ Chủng vi khuẩn E. coli cần xác định type huyết thanh đƣợc cấy trên thạch máu cừu, ủ ở 37oC trong vòng 18 ÷ 24 giờ.
+ Các kháng huyết thanh O chuẩn (đa giá và đơn giá) do hãng Denka, Seiken Co., Ltd, Niigata, Nhật Bản cung cấp.
+ Nƣớc muối sinh lý 0,85%, phiến kính sạch, que cấy.
- Tiến hành: Nhỏ lên phiến kính sạch, mỗi đầu một giọt nƣớc muối sinh lý, dùng
que cấy vô trùng lấy khuẩn lạc E. coli cần xác định trộn đều với 2 giọt nƣớc muối sinh lý để tạo thành dịch vi khuẩn. Ghi ký hiệu lần lƣợt, thí nghiệm, đối chứng. Nhỏ lần lƣợt một giọt kháng huyết thanh chuẩn và một giọt nƣớc sinh lý vào bên Thí nghiệm và bên đối chứng. Nếu có phản ứng ngƣng kết, sẽ xuất hiện trong vòng 30 giây (bên thí nghiệm). Phản ứng dƣơng tính khi hình thành ngƣng kết giữa kháng nguyên là vi khuẩn với kháng huyết thanh, tạo thành những hạt nhỏ trắng lấm tấm, dung dịch tách ra làm 2 phần là các hạt ngƣng kết và phần nƣớc trong. Với phản ứng ngƣng kết xảy ra nhanh, rõ rệt thì đƣợc đánh giá mức (++++). Tùy theo khả năng ngƣng kết có thể đánh giá mức ngƣng kết ở các mức độ khác nhau (+), (++), (+++). Phản ứng là âm tính khi hỗn dịch vi khuẩn với kháng huyết thanh đục đều nhƣ bên đối chứng.
Với những chủng có ngƣng kết với kháng huyết thanh đa giá, tiếp tục thực hiện với những kháng huyết thanh đơn giá thuộc nhóm để xác định rõ từng type huyết thanh. Trong trƣờng hợp các chủng có hiện tƣợng ngƣng kết chéo với nhiều
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
nhóm hoặc liên kết với nhiều đơn giá khác nhau, thì phải pha loãng kháng huyết thanh theo cấp số 2, kết quả sẽ lấy ngƣng kết ở cấp số pha loãng cao nhất [6].