- Xử lý mẫu vật: Mẫu vật sau khi phân tích số liệu về hình thái ngồi, các chỉ tiêu kích thước và khối lượng cơ thể, các đặc điểm sinh học, sẽ được định hình bằng phoĩc - mơn 10% sau đĩ bảo quản trong cồn 70 - 75%.
- Phân tích số liệu về hình thái:
+ Đo kích thước các phần cơ thể bằng thước kẹp điện tử (Mitutoyo, Kawasaki, Nhật Bản, sai số ± 0,01 mm). Cân khối lượng cơ thể bằng cân điện tử (Prokits, Đài Loan, sai số ± 0,1 g). Các số đo hình thái như chiều dài thân (SVL mm), dài đuơi
(TL, mm), rộng miệng (MW, mm) và tỷ lệ chiều dài đuơi tương đối (RTL = TL/SVL). Tiến hành quan sát hình thái ngồi, mơ tả và xác định lồi tương ứng.
+ Các thơng số đo được ghi đầy đủ vào phiếu để xử lý số liệu sau này.
+ Để xác định chỉ số dị hình kích thước giới tính của mỗi lồi (SSD = Sexual Size Dimorphism), chúng tơi sử dụng cơng thức sau [25]:
+ Để phân tích thơng kê sự sái khác của các số đo hình thái giữa con đực và con cái trưởng thành cũng như kiểm tra bộ mẫu, dữ liệu về hình thái như SVL, TL, MW được chuyển đổi bằng cách sử dụng lơgarít cơ số 10 (log10) để chuẩn hĩa số liệu nhằm đáp ứng các giả định bình thường của bộ mẫu trước khi phân tích một yếu tố ANOVA (One-way analysis of variance) [48]. Chúng tơi khơng log10 đối với chỉ tiêu RTL. Sự sái khác của TL, MW, BM và RTL giữa cá thể đực và cái trưởng thành được kiểm tra bằng cách sử dụng một yếu tố ANCOVA (One-way analysis of covariance) với SVL như một biến ảnh hưởng.
- Quan sát hình dáng bên ngồi để:
Xác định lồi Thằn lằn dựa vào số vạch trên vảy, hình dáng vảy ở đầu mút mỏm, số vảy ở ngĩn chân.
Xác định giới tính thơng qua màu sắc, số đốm trắng hai bên sườn, màu sắc hai vạch chạy dài từ sau mắt đến chi sau.
- Sinh thái học dinh dưỡng:
Mổ và phân tích thành phần thức ăn cĩ trong dạ dày: Mổ khoang bụng, tách riêng dạ dày, cân khối lượng của dạ dày cĩ thức ăn sau đĩ mổ dạ dày, gạt tồn bộ thức ăn vào đĩa Petri, cân lại dạ dày khơng cĩ thức ăn. Nếu con mồi nào quá nhỏ dùng kính lúp hoặc kính hiển vi soi nổi để quan sát.
Tiến hành phân loại con mồi để xếp nhĩm (chủ yếu đến Bộ) bằng cách căn cứ vào các tài liệu mơ tả của Thái Trần Bái (2001) [3] và Johnson & Triplehorn (2005) [28]. Những loại con mồi khơng thể xác định sẽ được cho vào dung dịch cồn 70-75o để bảo quản, sau đĩ nhờ chuyên gia phân tích. Tiến hành đo kích thước chiều dài (từ đầu đến ngực đối với cơn trùng) và chiều rộng (phần rộng nhất của cơ
khơng nguyên vẹn, thực hiện một phương pháp đánh giá tốt nhất bởi người phân tích sau đĩ tiến hành đo chiều dài và chiều rộng của mục thức ăn đĩ.
Các vật liệu thực vật được xem là thức ăn của hai lồi Thằn lằn bĩng này nên được sử dụng để tính tốn, trong khi các vật liệu như mùn bã hữu cơ, cát, sỏi, nhựa khơng được xem là mục thức ăn nên đã được loại bỏ từ nghiên cứu này.
Tính thể tích (V) của thức ăn bằng cách sử dụng cơng thức tính thể tích, cơng thức này đã được áp dụng phổ biến trên thế giới hiện nay để đánh giá dinh dưỡng của lồi (với π = 3,14159) [23, 45]. Cơng thức này cũng được dùng để tính thể tích của tinh hồn và buồng trứng [34]:
Sử dụng chỉ số quan trọng tương đối (IRI = Index of Relative Importance) để xác định tầm quan trọng của mỗi loại thức ăn đối với mỗi lồi Thằn lằn bĩng [23, 30, 35]. Cơng thức này được tính tốn như sau:
Trong đĩ: IRI là chỉ số quan trọng đối với mỗi loại thức ăn; F là tần số dạ dày chứa một mục con mồi cụ thể; N là tổng số mục con mồi đã đếm được; V là thể tích của con mồi tương ứng. Chỉ số IRI này cĩ ý nghĩa sinh học cao và sát với thực tế hơn bất kỳ một đánh giá riêng lẻ nào từ tần số (F), số lượng (N) hoặc thể tích (V) đối với mỗi lồi con mồi cụ thể [30, 40].
Để đánh giá tính đa dạng của việc sử dụng các loại thức ăn giữ cá thể đực và cá thể cái cũng như tồn bộ vùng nghiên cứu, chúng tơi sử dụng chỉ số đa dạng của Simpson (1949) [42]: D = Ʃ{ni(ni – 1)}/{N(N – 1)}. Trong đĩ, D là chỉ số đa dạng của Simpson (Simpson’s index), n là số lượng mục thức ăn của một loại con mồi cụ thể thứ i, N là số lượng tổng số của các mục thức ăn đã tìm thấy. Chúng tơi cũng chấp nhận sử dụng hình thức 1/D để báo cáo dữ liệu, khi 1/D càng lớn thì độ đa dạng càng cao và ngược lại [29, 33].
- Sinh thái học sinh sản:
Từ việc xác định giới tính qua hình thái kết hợp với mổ và phân tích các cơ quan sinh dục để đảm bảo việc xác định giới tính qua hình thái: xác định khối lượng
tinh hồn, ống dẫn trứng từng bên, đếm số lượng trứng ở mỗi bên trong mùa giao phối và sinh sản.
Phân tích tinh hồn và buồng trứng theo tháng để đánh giá khả năng sinh sản của lồi. Mổ ổ bụng, đếm số lượng trứng, đo chiều dài và chiều rộng của tinh hồn và buồng trứng hoặc trứng.
Phân loại trứng theo 3 mức: trứng nhỏ (đường kính nhỏ hơn 5 mm), trứng lớn (đường kính từ 5-10 mm) và trứng già (phơi) trong ống dẫn trứng. Đặc biệt, ở lồi Eutropic multifasciata phơi già cĩ nhiều giai đoạn: trứng già chưa hình thành con, trứng đã hình thành con và nhập chung lại thành một khối, trứng đã hình thành con được tách ra thành từng phơi sau đĩ phát triển thành con hồn chỉnh. Ở giai đoạn phơi, cân đo thể vàng và con non cụ thể để phân tích ở phần sinh sản.
Tiến hành xác định thể tích, các chỉ tiêu kích thước của tinh hồn trái và phải theo mỗi tháng. Thơng qua sự phát triển của buồng trứng và tinh hồn trái - phải, các số liệu thu được tại 3 điểm nghiên cứu trong mỗi tháng, từ đĩ xác định tỷ lệ đực cái, mùa sinh sản và khả năng sinh sản của mỗi lồi.