CHƯƠNG 2: CÁC PHƯƠNG PHÁP SẢN XUẤT COLLAGEN
2.1.8Năm 2009, Zhang Liu Li đã có các nghiên cứu trên loài cá da trơn (Largefin longbabel)
longbabel)
Trong nghiên cứu này, quá trình tẩy rửa được tiến hành ở 40C, trong điều kiện khuấy trộn. Da được ngâm với dung dịch NaOH 0,1M với tỉ lệ 1/20 (w/v) trong vòng 24h. Tiến hành thay dung dịch một lần sau 24h để loại bớt tạp chất non-collagen, chất béo, chất màu và mùi tanh. Rửa lại với nước cho sạch. Sau đó tiếp tục loại béo bằng dung dịch butyl ancohol 15%(v/v), tỉ lệ 1÷ 20 thực hiện 2 lần trong vòng 12h. Rửa lại với nước lạnh cho sạch, sau đó tiếp tục tẩy màu với dung dịch H2O2 3%, rửa 2 lần trong vòng 24h. Rửa lại với nước lạnh cho sạch.
Sau khi được xử lý, da được chiết với dung dịch acetic 0,5M có khuấy trộn, tỉ lệ nguyên liệu / dung dịch là 1/15, thực hiện trong thời gian 24h ở nhiệt độ lạnh 40C, sau đó dịch chiết được ly tâm lạnh. Phần bã được chiết tiếp lần 2 bằng dung dịch acid acetic trong thời gian 12h. Ly tâm dịch chiết, tất cả 2 phần dịch chiết được thêm NaCl đến nồng độ 0,7M để kết tủa collagen. Ly tâm lấy phần kết tủa đem tinh sạch.
Lượng collagen thô được hòa tan hoàn toàn vào dung dịch acid acetic 0,5M để loại bỏ các tạp chất không tan trong acid. Dung dịch được thẩm tách với acid acetic 0,1M trong 3 ngày, thay acid mỗi ngày. Phần kết tủa được làm lạnh khô bằng thiết bị đông khô khô (Labconco Freezone 2,5L, USA) thu được sản phẩm collagen sạch acid soluble collagen (ASC).
Phần bã sau khi đã chiết 2 lần với acid acetic, đem chiết tiếp tục với dung dịch acid acetic 0.5M chứa 15%(w/w) pepsin trong thời gian 30 phút ở nhiệt độ 40C, khuấy liên tục. Cho kết tủa và tinh sạch như trên, thu được collagen sạch pepsin soluble collagen (PSC). Ngoài các phương pháp phân tích collagen như tiến hành chạy sắc kí điện di, đo độ nhớt và nhiệt độ biến tính của collagen, tác giả còn nghiên cứu sâu thêm về collagen bằng cách đo phổ hấp thu tử ngoại của dung dịch collagen bằng quang phổ kế. Kết quả cho thấy rằng mặc dù protein có bước sóng hấp thu cực đại ở vùng tử ngoại gần là 280nm nhưng collagen không có bước sóng nào trong vùng này. Cả collagen ASC và PSC đều hấp thu ở bước sóng là 233nm. Bên cạnh đó, tác giả còn tiến hành đo phổ hồng ngoại FTIR để xác định bước sóng hấp thu của các amide của cả 2 loại collagen là ASC và PSC.