Đõy là phương phỏp kinh điển được sử dụng phổ biến để biến nạp DNA plasmid vào tế bào E.coli. Cỏc tế bào được ủ trong dung dịch CaCl2 để trở
thành tế bào khả biến giỳp cho chỳng dễ tiếp nhận DNA plasmid. DNA plasmid được đưa vào tế bào bằng cỏch sốc nhiệt nhanh (40-60 giõy), cỏc tế
trờn đĩa agar chứa mụi trường LB với khỏng sinh thớch hợp. Mỗi khuẩn lạc trờn đĩa khỏng sinh đại diện cho một thể biến nạp đơn.
E.coli BL21 (DE3) là chủng vi khuẩn biểu hiện gen thường được sử
dụng khi biểu hiện 1 protein lạ và là vật chủ phự hợp cho biểu hiện protein khi dựng vector biểu hiện cú chứa promoter tac như vector pGEX. Hơn nữa chủng vi khuẩn E.coli BL21 (DE3) đó được biến đổi để tăng cường khả năng biểu hiện protein ngoại lai. Bởi vậy đõy là chủng phự hợp với đối tượng và mục đớch nghiờn cứu của đề tài.
Tế bào E.coli BL21 (DE3) khụng cú khả năng khỏng khỏng sinh ampicillin nờn sau khi biến nạp và nuụi cấy trải trờn mụi trường LB đặc cú bổ
sung ampicillin 100mg/l sẽ cú cỏc trường hợp sau xảy ra: (1) Cỏc tế bào khụng chứa vector tỏi tổ hợp sẽ khụng mọc được trờn mụi trường cú chứa khỏng sinh ampicillin. (2) Cỏc tế bào cú chứa vector tỏi tổ hợp EltB- pGEX mang gen mó húa cho EltB và cú gen khỏng khỏng sinh nờn mọc được trờn mụi trường chọn lọc. Trong nghiờn cứu này, khả năng chắc chắn đảm bảo cho sự biến nạp được plasmid pGEX- EltB vào tế bào E.coli BL21 dựa vào mụi trường chọn lọc cú ampicilline để lựa chọn khuẩn lạc cú vector pGEX-EltB, vỡ tế bào E. coli BL21 chỉ mọc được khi mang gen khỏng khỏng sinh của pGEX; sau đú kiểm tra cỏc tế bào biến nạp bằng kỹ thuõt PCR, kết quảở hỡnh 3.7 cho thấy sản phẩm thu được ở cỏc giếng từ 2-5 là một băng rừ nột cú kớch thước tương đương với kớch thước ở chứng dương ở giếng số 1 (khoảng 312 bp). Như vậy chỳng tụi đó biến nạp plasmid pGEX- EltB vào tế bào biểu hiện protein E.Coli BL21 thành cụng.