Chƣơng III Thực Nghiệm
3.4.2.7. Xỏc định hàm lƣợng đƣờng khử bằng 3,5 – dinitrosalycylic acid: 1 Nguyờn tắc:
3.4.2.7.1. Nguyờn tắc:
Cú nhiều phương phỏp khỏc nhau để xỏc định hàm lượng đường khử nhờ cỏc đặc tỉnh khử của đường khử. 3,5 – dinitrosalycylic acid (DNS) màu vàng trong dung dịch kiềm sẽ bị khử thành acid 3 – amino – 5 nitrosalyscylic aicd cú màu vàng cam. Phương trỡnh:
Húa học của phản ứng khỏ phức tạp vỡ đường chuẩn khụng phải luụn qua gốc tọa độ và mỗi loại đường khử khỏc nhau sẽ thu được một màu khỏc nhau. Vỡ vậy phương phỏp này khụng thớch hợp lắm để xỏc định một mẫ chưa hỗn hợp nhiều đường khử khỏc nhau.
3.4.2.7.2. Húa chất:
- Sodium potassium tartrate.
- 3,5 – dinitrosalycylic acid (DNS). - NaOH 2M.
3.4.2.7.3. Cỏch tiến hành:
Dung dịch thuốc thử DNS chỉ nờn pha chế trước khi sử dụng, dung dịch này được giữ trong chai nõu và trỏnh tỏc động của CO2.
Hỳt 3ml dung dịch mẫu cú chứa đường vào một ống nghiệm, thờm vào đú 1ml thuốc thử DNS.
Chuẩn bị ống nghiệm khụng một ống nghiệm tương tự nhưng thay 3ml dung dịch mẫu bằng 3ml nước cất.
Luận văn tốt nghiệp Chương III. Vật liệu và phương phỏp
SVTH: Lờ Hựng Triết Trang 57
Làm lạnh về nhiệt độ phũng và đo độ hấp thu OD ở bước súng 540nm. Dựng ống nghiệm khụng để chuẩn độ truyền suốt về 100%. Chỳ ý cỏc ống nghiệm cần đưa về nhiệt độ phũng trước khi đo OD vỡ độ hấp thu rất nhạy với nhiệt độ.
Dựa vào đường chuẩn suy ra nồng độ đường khử cú trong mẫu. Cỏch dựng đường chuẩn:
Cõn chớnh xỏc 1g glucose (dạng khụ khụng ngậm nước) hũa tan thành 200ml với nước cất bằng bỡnh định mức.
Hỳt lần lượt 1, 2, 3, 4, 5 ml dung dịch đường này cho vào bỡnh định mức 50ml và định mức đến vạch bằng nước cất.
Cỏc dung dịch này cú nồng độ đường lần lượt là 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 mg/ml. Sau đú thực hiện như đĩ núi ở trờn và đo OD để dựng đường chuẩn.
Vẽ đồ thị biểu diễn sự biến thiờn giữa nồng độ đường và độ hấp thu ở bước súng 540nm.