- Bệnh phẩm sau khi lấy đƣợc bảo quản và vận chuyển ngay tới phũng xột nghiệm vi rỳt sởi viện Vệ sinh Dịch tễ trung ƣơng trong vũng 48h để tiến hành nuụi cấy và phõn lập theo cỏc bƣớc sau:
Xử lý bệnh phẩm
Xử lý bệnh phẩm với khỏng sinh: mụi trƣờng xử lý bệnh phẩm cú 200u/ml penicillin và 200u/ml streptomycin. Trộn kỹ trờn mỏy lắc để cỏc chất dớnh vào tăm bụng đƣợc hoà tan vào mụi trƣờng, loại bỏ tăm bụng.
Ủ 1 giờ ở nhiệt độ phũng.
Cỏc bƣớc nuụi cấy phõn lập.
Nuụi cấy tế bào Vero/ SLAM trờn chai 25cm2
, chọn chai tế bào một lớp cú độ phỏt triển kớn khoảng 80%
Đổ mụi trƣờng phỏt triển và thay bằng mụi trƣờng duy trỡ D- MEM 2% huyết thanh bờ bào thai để phõn lập vi rỳt.
Gõy nhiễm 0,5-1ml bệnh phẩm vào chai tế bào. Ủ tế bào tại 370
C
Theo dừi tế bào hàng ngày phỏt hiện sự huỷ hoại tế bào dƣới kớnh hiển vi lộn ngƣợc.
Sau 4-5 ngày gõy nhiễm, nếu tế bào khụng hủy hoại thỡ cấy chuyển bằng cỏch trypsin hoỏ tỷ lệ 1:3
Nếu cấy chuyển lần 2 sau 4-5 ngày vẫn khụng cú hủy hoại thỡ cú thể cấy chuyển thờm một lần nữa theo tỷ lệ 1:3. Sau 3 lần cấy chuyển nếu khụng cú huỷ hoại tế bào thỡ kết quả là õm tớnh.
Khi cú huỷ hoại tế bào khoảng 75% thỡ gặt tế bào và giữ ở -700
C để xỏc định chủng vi rỳt sởi cũng nhƣ phõn tớch vật liệu di truyền để xỏc định kiểu gien của vi rỳt.
Phƣơng phỏp gặt tế bào để giữ chủng vi rỳt
Nạo tế bào khỏi thành chai vào mụi trƣờng.
Hỳt hết mụi trƣờng và tế bào vào tube ly tõm và ly tõm 1500 vũng/ 1 phỳt. Loại bỏ dịch nổi và hoà cặn tế bào vào 1ml D-MEM-PS. Chia ra hai tube và cất ở -700C.