Kỹ thuật này nhằm xỏc định hiệu giỏ khỏng thể IgM khỏngvi rỳt sởi : Theo thƣờng quy của bộ kớt Behring Enzygnost anti Measles Vi rỳt IgM.
Sơ đồ 2.1: phản ứng ELISA xỏc định khỏng thể IgM/Sởi
Kỹ thuật tiến hành:
Hồi chỉnh RF absorbent: thờm 5ml nƣớc cất vào mỗi lọ. Đỏnh dấu cỏc tube làm phản ứng: P/N, P/P, M1,M2,P/P. Cho 400 l sample buffer vào mỗi tube P/N và P/P.
Thờm 20 l chứng chuẩn P/N, P/P vào mỗi tube tƣơng ứng. Trộn đều. Nhỏ 10 l mẫu vào mỗi tube đƣợc đỏnh dấu. Trộn đều nhẹ nhàng. Nhỏ 210 l RF absorbent vào mỗi tube mẫu tƣơng ứng. Trộn kỹ. ủ ở nhiệt độ phũng trong 15 phỳt (hấp phụ IgG trong huyết thanh).
Ủ 370C trong 60 phỳt trong tỳi kớn.
Chuẩn bị cộng hợp: Pha 250 l cộng hợp với 12,5 ml đệm và lắc trộn nhẹ nhàng. Chuẩn bị pha dung dịch rửa: 20ml dung dịch rửa POD + 400 ml nƣớc cất.
Rửa tấm 4 lần bằng dung dịch rửa đó pha loóng. Đập nhẹ tấm loại bỏ dịch thừa.
Nhỏ 100 l cộng hợp POD/ khỏng IgM của ngƣời vào mỗi giếng. Bọc kớn, ủ 370
C trong 60 phỳt.
Chuẩn bị dung dịch cơ chất: 1ml Chromogen TMB trộn với 10ml đệm cơ chất TMB. Rửa 2 lần.
Nhỏ 100 l dung dịch cơ chất Chromogen vào mỗi giếng. Bọc tấm trong tỳi kớn. ủ tối 30 phỳt ở nhiệt độ phũng.
Nhỏ 100 l chất dừng phản ứng vào cỏc giếng
Đọc kết quả bằng mỏy đọc ở bƣớc súng 450 và 650 nm trong vũng một giờ.
Phõn tớch kết quả:
A= OD đo đƣợc ở giếng mẫu cú khỏng nguyờn - OD đo đƣợc ở giếng chứng khỏng nguyờn
- Tiờu chuẩn phản ứng:
A của chứng P/P chuẩn phải nằm trong giới hạn cho phộp (theo bảng giỏ trị barcode). Độ chờnh lệch giữa cỏc giỏ trị P/P trong cựng một dóy giỏ trị của tấm khụng khỏc biệt nhau quỏ 20%.
A của chứng P/P chuẩn ≥0,2 A của chứng P/N chuẩn ≤ 0,1
- Kết quả phản ứng:
+ Kết quả õm tớnh với khỏng thể IgM khỏng sởi nếu A < 0,100. + Kết quả dƣơng tớnh với khỏng thể IgM khỏng sởi nếu A > 0,200. + Kết quả nghi ngờ nếu 0,100 < A < 0,200.