Mẫu được đưa về phòng thí nghiệm, tiến hành kiểm tra sự nhiễm nấm bằng phương pháp soi tươi dưới kính hiển vi.
Cách xử lý: Cắt mẩu mang, vây đuôi nhỏ một giọt nước muối sinh lý lên, ép la men lên, soi dưới kính hiển vi quang học (độ phóng đại 100 & 400 lần) để kiểm tra sự nhiễm nấm.
Cấy mẫu vào môi trường PDA có bổ sung 500µm/ml kháng sinh Peniciline & Streptomycin (để hạn chế sự phát triển của vi khuẩn). Lưu ý phải hơ dụng cụ cấy trên ngọn lửa đèn cồn trước khi cấy mẫu và cắt mẫu. Sau đó nuôi cấy để ở môi trường nhiệt độ 25oC, sau 2-4 ngày quan sát sự phát triển của khuẩn lạc, giống nấm sẻ được thuần loài bằng phương pháp nuôi cấy một bào tử.
Phương pháp nuôi cấy nấm thuần:
Đối với nấm bậc thấp: Từ khuẩn lạc phát triển trên môi trường PDA, ở nhiệt độ 25oC. Sau 3-4 ngày khuẩn lạc phát triển thì cắt 1 khối khoảng 0.5 cm2 nhuộm xanh malachit, soi dưới kính hiển vi thấy xuất hiện bào tử. Sau đó dùng Micropipet hút khoảng 100 µL nước nghèo dinh dưỡng APW cho vào hộp lồng có chứa các sợi nấm thu từ khuẩn lạc nấm trên, dùng que trang trang đều hộp lồng, từ hộp lồng đó hút khoảng 10 µL cấy sang đĩa môi trường PDA mới nuôi ở nhiệt độ 25oC. Khuẩn lạc phát triển trên đĩa thạch mới này được chọn là khuẩn lạc thuần loài cho thí nghiệm.
Phương pháp phân loại nấm:
Phân loại nấm: Lấy mẫu sợi nấm soi tươi hoặc nhuộm Green Malachite. Quan sát hình dạng, đặc điểm của khuẩn ty, bào tử và dựa vào tài liệu phân loại để xác định.
Phân loại nấm bậc thấp áp dụng phương pháp của G.C.Ainsworth; Frederick K. Sparrow và ctv, 1973.
Phương pháp xác định kích thước hiển vi của nấm:
Tiến hành đo kích thước: Đường kính sợi nấm, bào tử, túi bào tử…
Mỗi yếu tố tiến hành đo 30 lần, tính kích thước trung bình của mỗi yếu tố. 2.4. Phương pháp xử lý số liệu:
Phương pháp thu thập số liệu
Số liệu thứ cấp: số liệu thông qua các báo cáo của sở Nông Nghiệp, sở Khoa học và Công nghệ tỉnh Lâm Đồng; các bài báo có liên quan đến đề tài nghiên cứu này.
Số liệu sơ cấp: Thời gian, số lượng cá được thu. Kích thước, khối lượng cá.
Các thông số về tỷ lệ cảm nhiếm, cường độ cảm nhiễm… Xác định các thông số môi trường: nhiệt độ, pH…
Phương pháp phân tích số liệu: tổng hợp, phân tích, so sánh, rút ra các nhận xét.
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. Nhận xét chung về hiện trạng nghề nuôi cá tầm nói riêng và nuôi cá nước lạnh nói chung tại Lâm Đồng: lạnh nói chung tại Lâm Đồng:
Lâm Đồng là tỉnh có nhiều lợi thế về đất đai, khí hậu và nguồn tài nguyên nước mát, nước lạnh (nhiệt độ dưới 180C, độ cao từ 600 m trở lên) cho phép phát triển nghề nuôi các dòng cá nước lạnh như cá tầm, cá hồi.
Hiệp hội Cá nước lạnh Lâm Đồng cho biết: Trong số 21 tỉnh phát triển nghề nuôi cá tầm, cá hồi, Lâm Đồng là tỉnh có sản lượng cao nhất nước Cả tỉnh hiện có 35 đơn vị và cá nhân được UBND tỉnh cho phép đầu tư phát triển nuôi cá nước lạnh với tổng diện tích đất theo đăng ký là 3.072 ha, trong đó có 376 ha mặt nước trực tiếp nuôi cá, và với tổng vốn đầu tư lên đến trên 1.000 tỉ đồng. Sản lượng cá nước lạnh thương phẩm trên địa bàn tỉnh tăng nhanh Năm 2007, sản lượng đạt được chỉ vào tầm 20 tấn; con số này đã tăng lên 185 tấn năm 2009; 350 tấn năm 2011 và dự kiến năm 2012, con số này không dưới 400 tấn.
Tuy nhiên, để phát triển bền vững nghề nuôi cá nước lạnh nói chung và nuôi cá tầm nói riêng, Lâm Đồng cần giải quyết những khó khăn đang gặp phải như:
Phong trào phát triển nuôi cá nước lạnh vẫn tự phát, không theo quy hoạch nên dễ dẫn đến việc gây ô nhiễm nguồn nước và dịch bệnh xảy ra là điều khó trách khỏi.
Người nuôi cá tầm còn thiếu thông tin, kiến thức về giống, hiện nay nước ta chỉ sản xuất được giống cá hồi, còn cá tầm phải nhập khẩu trứng đã thụ tinh về ấp với giá rất cao.
Bất cập thứ ba hiện nay đối với nghề nuôi cá nước lạnh chính là nguồn thức ăn. Việt Nam vẫn phải nhập khẩu thức ăn cho cá nước lạnh từ Pháp, Phần Lan …
Mặt khác, hầu hết các doanh nghiệp, trang trại nuôi cá nước lạnh chưa có dự án khả thi nên việc sản xuất còn chưa chuyên môn hóa, công nghệ khép kín chưa cao. Bên cạnh đó, việc xúc tiến thị trường, quảng bá thương hiệu, nhãn hiệu chưa được nhiều doanh nghiệp chú trọng.
Để nghề nuôi cá nước lạnh Lâm Đồng nói riêng và cá nước lạnh Việt Nam nói chung phát triển, cần tận dụng những thế mạnh và phát triển theo hướng bền vững như: hoàn thiện quy hoạch tổng thể cho từng vùng, hướng tới vùng nuôi theo tiêu
chuẩn VietGap; chủ động nguồn giống thức ăn; khai thác nghề nuôi cá nước lạnh theo các mô hình “liên kết dọc” nhằm duy trì quyền lợi, giảm thiểu rủi ro cho người nuôi. 3.2. Một số bệnh thường gặp trên cá tầm nuôi thương phẩm tại Lâm Đồng xuất
hiện trong thời gian nghiên cứu:
Trong vài năm trở lại đây phong trào nuôi cá nước lạnh đang phát triển rất nhanh, đặc biệt là ở các tỉnh miền núi, nơi có khí hậu ôn đới thuận lợi cho sự phát triển của cá. Trong đó không thể không kể đến Lâm Đồng, một trong những địa phương đi đầu về phát triển nghành nghề này, trong đó cá tầm là đối tượng đang rất được quan tâm.
Các loài cá tầm được nuôi đa số là cá tầm lai, cá tầm Nga và cá tầm Siberi. Cá sinh trưởng và phát triển tốt, ít xảy ra dịch bệnh. Cá giống cỡ 10-15cm sau 18 tháng nuôi đạt trung bình từ 3kg, con lớn nhất đạt 5-6 kg, con nhỏ nhất đạt 1,5kg. Cá được nuôi ở hai hình thức là nuôi ao tại các địa phương điển hình như: KlongKlanh, Giang Ly, Đức Trọng, Bảo Lộc, Lâm Hà trong đó tại Đức Trọng đang thử nghiệm mô hình nuôi cá tầm thương phẩm trong ao đất và trong bể xi măng 130 m3; nuôi trong lồng đặt trên các hồ: Tuyền Lâm, Di Linh, Bảo Lâm . Ao nuôi có kích thước trung bình là 500m2, sâu 2m, lồng nuôi hình tròn đường kính 12-14 m, sâu 5-6 m, mật độ thả trung bình từ 5-10 con/m3.
Nuôi trong ao nước chảy: thuận tiện ở những nơi có nguồn nước phong phú, trong sạch, nhiệt độ 18-270C. Cá được nuôi trong ao lót bạt, hoặc bê tông, cỡ giống từ 15-20 cm, sử dụng thức ăn viên hàm lượng đạm trên 43%, đa số các trại nuôi sử dụng thức ăn dành cho cá Mú của công ty UP, một số trại sử dụng thức ăn nhập từ nước ngoài về. ước tính thời gian nuôi 12 tháng cá đạt kích thước từ 2-3 kg/con, nếu nguồn nước tốt có thể đạt 30-40 tấn/ha.
Nuôi cá tầm trong lồng trên hồ chứa: lồng nuôi bằng khung gỗ hoặc khung lồng HDPE đặt ở các hồ chứa có nguồn phong phú, độ sâu trên 4m, trong sạch, độ đục >60cm, nhiệt độ 18-270C. Cỡ giống từ 100-150gam/con, nếu cá giống nhỏ hơn có thể làm thêm lồng ương giống. Nguồn nước tốt năng suất có thể đạt 30kg/1m 2 lồng.
Hình 3.2: Nuôi cá tầm trong lồng ở hồ Tuyền Lâm
Trong thời gian thực hiện đề tài cũng đã phần nào đánh giá sơ bộ được hiện trạng nuôi và một số bệnh thường xuất hiên trên cá tầm nuôi thương phẩm. Qua điều tra cho thấy cá tầm nuôi gặp khá nhiều bệnh và đã gây thiệt hại đáng kể về sản lượng và giá trị thương phẩm của cá. Các bệnh thường gặp ở cá tầm nuôi ở Lâm Đồng trong thời gian nghiên cứu bao gồm chủ yếu là bệnh xuất huyết, bệnh sưng miệng và bệnh cá bơi quay, mất đinh hướng.
3.2.1. Bệnh xuất huyết, lở loét:
Bệnh này thường bắt gặp khi nhiệt độ nước tăng cao hơn 240C, đặc biệt là sau những trận mưa lớn, môi trường thay đổi đột ngột. Cá bị bệnh xuất hiện nhiều điểm xuất huyết trên thân, các gốc vây, đầu và hậu môn. Cá bệnh nặng còn có những vết loét dọc hai bên đường bên, dưới bụng. Cá bệnh bơi lờ đờ, da tối màu, ăn ít rồi bỏ ăn sau đó chết. Giải phẫu cá cho thấy gan bị tái, màu sắc nhợt nhạt, mềm nhũn, lách bầm, thận xuất hiện nhiều đốm trắng.
Nhìn chung cá bị bệnh chết rải rác quanh năm không có mùa vụ rõ ràng. Kích thước cá bệnh thường bắt gặp là từ 500g trở lên, tức là khoảng 4 tháng tuổi. Sau khi thay nước ao, vệ sinh đáy hiện tượng chết giảm dần, kết hợp cho ăn thức ăn có bổ sung
vitamin C, E thấy có hiệu quả, nhưng không dừng hẳn. Một số hộ nuôi đã dùng kháng sinh oxytetracylin để trị cho thấy hiện tượng chết giảm.
Hình 3.3: Cá tầm bị bệnh xuất huyết 3.2.2. Bệnh sưng miệng:
Cá có dấu hiệu sưng miệng thường xuất hiện sau những đợt nắng kéo dài gây ức chế cho cá, hay mưa lớn làm thay đổi đột ngột các yếu tố môi trường gây sốc cho cá. Cá bệnh quan sát thấy miệng bị sưng đỏ, xuất huyết xung quanh miệng làm cá không ăn được mà chết. Cá bệnh nặng có thể kèm theo các điểm xuất huyết trên thân, gốc vây do cá ngứa miệng bơi lội lung tung va đập vào thành ao, lồng làm trầy xước, tạo điều kiện cho các tác nhân thứ cấp xâm nhập, do đó bệnh nặng và chết nhanh hơn.
Hình 3.4: Cá tầm bị bệnh sưng miệng
Bệnh này ít bắt gặp hơn bệnh xuất huyết, lở loét nhưng tỷ lệ chết cao hơn và thiệt hại nhiều hơn. Kích cỡ cá mắc bệnh cũng giống với bệnh lở loét, mùa vụ xuất
hiện bệnh không rõ ràng. Sau khi vệ sinh ao, lồng, kết hợp cho ăn thêm vitamin C, E thấy tỷ lệ chết giảm. Thử dùng kháng sinh Oxytetracylin trộn vào thức ăn nhưng hiệu quả chưa cao do cá bị bệnh miệng sưng đỏ không ăn được và một phần thuốc bị hoà tan vào môi trường làm giảm tác dụng của thuốc.
3.2.3. Bệnh cá bơi quay, mất định hướng:
Bệnh thường xuất hiện khi môi trường nuôi bị ô nhiễm, đặc biệt là thức ăn không đảm bảo chất lượng. Bệnh này xảy ra ở nhiều giai đoạn cá, đầu tiên cá bơi yếu, lờ đờ, kém ăn hoặc bỏ ăn. Cá bệnh nặng bơi quay tròn không định hướng, mắt đục và lồi ra, bụng trương to, cá bị bệnh thường da sẽ chuyển sang hơi vàng. Cá bệnh lâu sẽ có biểu hiện thêm dấu hiêu xuất huyết bên ngoài, gốc vây.
Giải phẩu bên trong thấy bệnh lý điển hình là ruột trương to, gan nhợt nhạt, mềm nhũn, thận có nhiều điểm trắng. Bệnh này có thể gâychết 40-50% cá nếu không có biện pháp phòng trị kịp thời. Một số trại nuôi có sử dụng kháng sinh cộng thêm bổ xung vitamin vào khẩu phần ăn của cá có tác dụng diều trị bệnh cao.
3.3. Kết quả kiểm tra tổng thể các mẫu cá thu được:
Tổng cộng có 34 mẫu cá được thu ngẫu nhiên tại các địa điểm có nuôi cá tầm trong tỉnh Lâm Đồng. Trong đó bao gồm 24 mẫu được thu tại những địa phương có diện tích nuôi cá tầm khá lớn là Giang Ly thuộc xã Klong Klanh, huyện Lạc Dương, hồ Tuyền Lâm thuộc thành phố Đà Lạt đây cũng là 2 địa điểm đại diện cho 2 phương thức nuôi khác nhau là nuôi trong ao tại Giang Ly và nuôi lồng tại hồ Tuyền Lâm. Bên cạnh đó đề tài cũng thu được 6 mẫu cá nuôi trong ao nuôi nước chảy tại Lâm Hà và 4 mẫu nuôi trong ao đất tại Quảng Hiệp. Số liệu được trình bày trong bảng:
Bảng 3.1: Phân bố mẫu cá tầm thu Loài
Nơi thu mẫu A. gueldenstaedtii A. baerii Tổng
Tuyền Lâm 5 9 14
Giang Ly 4 6 10
Lâm Hà 0 6 6
Quảng Hiệp 0 4 4
Cá được thu ngẫu nhiên bao gồm 2 loài đó là cá tầm Nga (Acipenser gueldenstaedtii Brandt, 1833) 10 mẫu và cá tầm Siberi (Acipenser baerii Brandt, 1833) 24 mẫu với các thông số về chiều dài trung bình là 471,76 ± 128,13 mm (240 - 740), trọng lượng trung bình là 464,70 ± 324,36 gram (100 – 1100). Số liệu được trình bày trong bảng
Bảng 3.2: Các thông số về số lượng, chiều dài, khối lượng mẫu thu Chỉ tiêu đánh giá Dữ liệu
Số lượng (cá) 34
Chiều dài (mm) 471,76 ± 128,13 (240 - 740) Khối lượng (g) 464,70 ± 324,36
(100 – 1100)
Mẫu cá tầm thu bao gồm 5 mẫu cá khỏe và 29 mẫu cá bệnh trong đó cá bị bệnh xuất huyết lở loét chiếm tỷ lệ cao nhất với 35,3% (12/34 mẫu), tiếp theo là cá bị sưng miệng 23,5% (8/34 mẫu), bệnh cá bơi quay xuất hiện với tần xuất là 26,5% (9/34). Tất cả các mẫu thu đều nằm trong kích cở thương phẩm, tuy nhiên đối với bệnh cá bơi quay, mất định hướng thấy xuất hiện ở cả cá có kích thước thương phẩm và cá có kích thước tương đối nhỏ hơn cá bệnh khác (chiều dài trung bình 318mm, khối lượng trung bình 126g). Số liệu được trình bày ở bảng:
Bảng 3.3: Tần số bắt gặp các mẫu cá tầm thu Tình trạng cá Tần số bắt gặp (cá thể) Tỷ lệ (%) Cá khỏe 5 14,7 (5/34) Xuất huyết 12 35,3 (12/34) Sưng miệng 8 23,5 (8/34)
Bơi quay, mất định hướng 9 26,5 (9/34)
0 5 10 15 20 25 30 35 40
Cá khỏe Xuất huyết Sưng miệng Bơi quay, mất định hướng 14.71 35.29 23.53 26.47 T ầ n ssố b ắ t g ặ p %
Hình 3.5: Đồ thị biểu diễn TSBG các mẫu cá tầm
Ngoài ra trong quá trình thu mẫu cũng bắt gặp hiện tượng cá chết nhưng bên ngoài không thấy dấu hiệu gì, giải phẫu nội tạng thấy gan hơi trắng. Cá thường chết vào ban đêm, tỷ lệ chết không nhiều (1-2 con) và thỉnh thoảng mới xuất hiện hiện tượng này nên tôi đã không đưa vào báo cáo.
Hình 3.6: Cá tầm chết không có dấu hiệu
3.4. Kết quả nghiên cứu tác nhân gây bệnh trên cá tầm nuôi thương phẩm: 3.4.1. Bệnh do vi khuẩn: 3.4.1. Bệnh do vi khuẩn:
3.4.1.1. Kết quả thu mẫu:
Kiểm tra 29 mẫu cá tầm bị bệnh có dấu hiệu do VK gây ra bao gồm 12 mẫu cá bị xuất huyết, lở loét, 8 mẫu cá bị sưng miệng, 9 mẫu cá có dấu hiệu bơi quay, mất định hướng, kết quả thu được như sau:
3.4.1.2. Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn: 3.4.1.2.1.Cá bị lở loét: 3.4.1.2.1.Cá bị lở loét:
Mẫu vi khuẩn được phân lập từ gan, thận, lách và vết xuất huyết lở loét của cá bệnh (12 mẫu), nuôi cấy trên môi trường TSA, ủ ở tủ ấm 250C, sau 24 giờ quan sát khuẩn lạc, ghi chép hình thái, màu sắc khuẩn lạc, nuôi cấy thuần sau đó định danh VK.
Dựa vào các đặc điểm về hình dạng khuẩn lạc, nhuộm gram, phản ứng sinh hoá, tôi đã phân lập được 5 loài VK sau:
Aeromonas hydrophyla Pseudomonas cepacia Streptococcus sp.
Enterobacter sakazakii Serratia odorifera
Bảng 3.4: Tần số bắt gặp các loài VK trên cá tầm bị xuất huyết, lở loét Tần suất bắt gặp (%)
Loài vi khuẩn
Chung Gan Thận Lách Vết loét
Aeromonas hydrophyla 75 (9/12) 58,33 (7/12) 25 (3/12) 25 (3/12) 41,67 (5/12) Pseudomonas cepacia 58,33 (7/12) 33,33 (4/12) 25 (3/12) 8,33 (1/12) 8,33 (1/12) Streptococcus sp. 33,33 (4/12) 25 (3/12) 16,67 (2/12) 8,33 (1/12) 0 (0/12) Enterobacter sakazakii 16,67 (2/12) 16,67 (2/12) 8,33 (1/12) 8,33 (1/12) 0 (0/12) Serratia odorifera 8,33 (1/12) 8,33 (1/12) 0 (0/12) 0 (0/12) 8,33 (1/12) Qua bảng trên cho ta thấy được trên mẫu cá tầm bị xuất huyết, lở loét đã phân lập và định danh được 5 loài vi khuẩn, trong đó Aeromonas hydrophyla chiếm tỷ lệ cao nhất với 75% (9/12) số mẫu kiểm tra, đa phần loài VK này được tìm thấy ở gan cá bệnh với 7/12 mẫu gan phân tích, chiếm tỷ lệ 58,33%, ở vết loét là 41,67% (5/12 mẫu), ở thận và lách cũng xuất hiện loài vi khuẩn này với 3/12 mẫu.
Loài Pseudomonas cepacia cũng được tìm thấy 7/12 mẫu cá bệnh được kiểm tra, chủ yếu dũng được phân lập từ gan chiếm 33,33%, hiện chưa có 1 báo cáo chính