a. Dụng cụ và hóa chất
Thiết bị và dụng cụ: Tủ ấm, nồi hấp, que cấy đầu tròn, bông, kéo, panh, túi nylon
Hóa chất và môi trường: TSA (Merk, Germany) bổ sung 1,5% NaCl và KF Streptococcus agar (Merk, Germany), alcool 700.
b. Thu mẫu cá
Các mẫu cá chẽm có dấu hiệu lờ đờ, xuất huyết thu từ trại nuôi cá chẽm ở
Cam Ranh - Khánh Hòa được cho vào túi nylon chứa khoảng 1/2 lượng nước, sau
đó bơm khí oxy vào cột chặt túi. Vận chuyển nhanh về PTN, Trường Đại học Nha Trang để phân tích. Chỉ những mẫu bệnh phẩm còn sống mới được sử dụng để phân
lập vi khuẩn.
Phân lập vi khuẩn S. iniae từ cá chẽm
chẽm
Nghiên cứu đặc điểm của các chủng vi khuẩn phân lập (đặc điểm hình thái, test sinh hóa, định danh di truyền)
Xác định độ nhạy
kháng sinh củaS. iniae
Nghiên cứu khả năng sản sinh IgY lòng đỏ trứng của gà được miễn dịch
với S. iniae bất hoạt
Nghiên cứu phân bố khối lượng
GVHD: ThS. Nguyễn Thị Kim Cúc SVTH: Ngô Thị Giang
c. Phân lập vi khuẩn
Trước khi phân lập vi khuẩn, tiến hành mổ khám và quan sát các dấu hiệu
bệnh lý của cá bệnh. Mổ xoang bụng cá: mặt ngoài cơ thể cá được đánh sạch vảy và sát trùng thật kỹ bằng cồn 70o tại vị trí mổ để tránh sự tạp nhiễm vi khuẩn từ bên ngoài. Cắt bỏ vây lưng và vây ngực. Tiến hành mổ xoang bụng cá bằng dao mổ và kéo tiệt trùng theo 3 đường cắt (Hình 2.3). Dùng kẹp đã khử trùng gắp bỏ phần cơ
bụng cá đã cắt. Quan sát mô, cơ quan bên trong và ghi lại các dấu hiệu bệnh lí.
Hình 2.3 Cá chẽm Lates calcarifer
Sau khi các dấu hiệu lâm sàng của cá bệnh được ghi lại. Vi khuẩn sẽ được phân lập
từ 3 bộ phận là thận, gan và não của cá. Dùng kẹp vô trùng gạt các phần nội tạng sang
một bên, thận cá nằm sâu trong xoang bụng cá, ngay phía dưới xương sống. Dùng mũi kéo đã khử trùng cắt một vết nhỏ trên thận. Sau đó đưa que cấy vòng nhúng và xoay nhẹ
vào chỗ cắt cấy ria trên môi trường TSA (Merk, Germany) bổ sung 1,5% NaCl và KF Streptococcus agar (Merk, Germany). Vi khuẩn được nuôi cấy ở 370C trong 24h. Sau đó
các khuẩn lạc đơn được chuyển sang môi trường nuôi cấy tương tự để cấy thuần.
Mẫu gan và não cá cũng được lấy và nuôi cấy vi khuẩn tương tự như khi lấy ở mẫu
thận.