Các thể biến nạp mọc được trên mơi trường cĩ kháng sinh thích hợp ở bước trên được tiếp tục tiến hành kiểm tra sự hiện diện của vector tái tổ hợp bằng
Hình 22. Kết quả PCR thu nhận gen mã hĩa PreS1-S226
1. Thang 100bp 2. Sản phẩm PCR
phương pháp PCR khuẩn lạc với cặp mồi chuyên biệt cho từng gen. Sinh khối của các thể biến nạp được sử dụng trực tiếp làm nguồn DNA cho phản ứng PCR.
Sau khi chạy điện di kiểm tra kết quả phản ứng PCR khuẩn lạc, các thể biến nạp cho kết quả dương tính, tức cho sản phẩm PCR cĩ kích thước đúng với đoạn gen mục tiêu, được tiếp tục nuơi cấy trong ống nghiệm 5ml mơi trường LB cĩ bổ sung kháng sinh tương ứng để tiến hành tách chiết, thu nhận plasmid. Sau đĩ, kiểm tra sự hiện diện của vector tái tổ hợp bằng phương pháp PCR với cặp mồi đặc hiệu cho gen và phương pháp dùng enzyme cắt hạn chế.
Kết quả chạy điện di trên gel agarose (Hình 24) cho thấy phản ứng PCR cho sản phẩm cĩ kích thước tương ứng với đoạn gen mục tiêu. Đồng thời, plasmid của thể biến nạp sau khi được xử lý với hai enzyme BamHI và EcoRI cho hai vạch, một vạch cĩ kích thước bằng với kích thước của vector mở vịng, và một vạch tương ứng với đoạn gen mục tiêu. Với những kết quả này, cho phép khẳng định các thể biến nạp thu nhận được cĩ mang vector tái tổ hợp. Các dịng tái tổ hợp lần lượt được đặt tên dựa trên đoạn gen mục tiêu và vector biểu hiện tương ứng là pGEX-PreS1 và pET-PreS1-S226.
d. Kiểm tra trình tự nucleotide và axít amin của các dịng tái tổ hợp pGEX-PreS1 và pET-PreS1-S226