Vector tái tổ hợp pGEX-PreS226 được phân tích bằng phương pháp PCR, cắt giới hạn và giải trình tự.
Trong phương pháp PCR, plasmid tách chiết sẽ được sử dụng làm khuơn với cặp mồi đặc hiệu của gen preS226. Plasmid tái tổ hợp là plasmid cĩ mang gen
preS226 nên sản phẩm sau phản ứng PCR dự kiến sẽ cho một vạch cĩ kích thước 78bp bằng với kích thước của đoạn gen preS226 trên gel. Ngược lại, phản ứng PCR sẽ khơng cho sản phẩm khuếch đại.
Trong phương pháp cắt hạn chế, vector được xử lý bằng cặp enzyme BamHI /HindIII. Vector pGEX- preS226 được dự kiến sẽ bị cắt bởi cặp enzyme này cho sản phẩm là hai đoạn DNA cĩ kích thước tương ứng với pGEX (4.900bp) và
preS226 (78bp).
Các kết quả kiểm tra sàng lọc được trình bày trong Hình 21.
Sản phẩm PCR khuẩn lạc (giếng 3) ngang với vạch điện di của gen preS226
(giếng 2) cĩ kích thước 78bp khi so với thang 100bp (giếng 1). Điều này chứng tỏ tế bào kiểm tra cĩ mang đoạn preS226. Sản phẩm plasmid được tách chiết từ tế bào trên cĩ 2 vạch ứng với hai trạng thái tự nhiên của plasmid (giếng 4). Plasmid được cắt bởi hai enzym BamHI/EcoRI cho hai đoạn ngang với vector cắt mở vịng pGEX/BamHI-EcoRI (giếng 5) và đoạn preS226 (giếng 2). Sử dụng plasmid làm khuơn cho phản ứng PCR với cặp mồi đặc hiệu cho đoạn preS226 thu được sản phẩm khuếch đại (giếng 7) cĩ vạch điện di ngang với vạch điện di của đoạn
preS226 (giếng 2). Như vậy chúng tơi đã tạo dịng thành cơng tế bào E. coli
BL21(DE3 plysS) mang plasmid tái tổ hợp pGEX-PreS226 và đặt tên là dịng E. coli BL21(DE3 plysS)/pGEX-PreS226.
Hình 21. Kết quả phân tích vector pGEX- preS226 bằng phương pháp PCR và cắt giới hạn
1, Thang 100bp; 2, preS226; 3: Sản phẩm PCR khuẩn lạc; 4, pGEX-PreS226; 5, pGEX / BamHI +EcoRI; 6, pGEX-PreS226 /BamHI+ EcoRI; 7, Sản phẩm PCR của pGEX-PreS226; 8, Thang
3.8.4. Tạo các dịng E. coli biểu hiện GST-PreS1 và 6XHis-PreS1-S226