A. CÁ KOI
4.1.1. Tình hình nuơi
ðối tượng nuơi: Cá Koi chủ yếu được nuơi ao hoặc nuơi bè cho đến khi thành cá thương phẩm sẽ được chuyển lên nuơi ở bể ximăng hoặc bể kính. Trong các hộ
nuơi cĩ 10/15 (66,7%) hộ nuơi từ cá bố mẹ, tự sản xuất giống và nuơi lên cá thương phẩm, 2/15 hộ (13,3%) chỉ nuơi cá bố mẹ và 3/15 hộ (20%) chỉ nuơi cá thương phẩm.
Nguồn thức ăn: chủ yếu là trùn chỉ, bo bo đối với cá bột và cá giống, cịn cá bố mẹ
và cá thương phẩm thường sử dụng thức ăn cơng nghiệp và thức ăn tự pha chế
giữa cám với cá tươi.
Kinh nghiệm nuơi: ða số các hộ cĩ kinh nghiệm nuơi cá từ 3-10 năm, cĩ hộ lên
đến 20 năm.
Hình thức nuơi:
+ Nuơi bè: Mật độ nuơi từ 50-100 con/m2, giống được thả quanh năm khi kết thúc vụ nuơi trước là thả lại ngay, thời gian 1 vụ nuơi thường 4,5 tháng đến 6 tháng. Cá giống thường được xử lý trước khi thả nuơi, một số hĩa chất để xử lý như: muối, iodin, kháng sinh Oxytetracycline tắm trong 1 phút hoặc ngâm Tetracycline trong 1 giờ với liều lượng 1-2 viên/bao. Thức ăn thường dùng là thức
ăn cơng nghiệp như Cargill, và thức ăn tự phối trộn cĩ kết hợp với vitamin.
+ Nuơi ao: Ao nuơi được xử lý trước khi lấy nước trực tiếp từ sơng vào. Trước mỗi vụ nuơi cĩ xử lý ao bằng cách phơi ao 2-3 ngày, bĩn vơi với liều lượng 2,5-3 kg/100 m2, tiếp tục phơi 5-7 ngày rồi lấy nước vào, bĩn phân hữu cơ sau 1 tuần bắt đầu thả cá. Cá nhỏ cho ăn tảo Spirulina hoặc bobo, đối với cá lớn cho ăn thức ăn cơng nghiệp dạng viên. Một số hộ cho ăn thức ăn tự phối trộn cám xay, tấm, bèo. Nước cho ra vào trực tiếp theo thủy triều thường thay khoảng 30% và châm thêm khi hụt nước.
4.1.2. Tình hình bệnh
Tuột nhớt: Cơ thể cá bị mất nhớt, cứng mình, trắng mắt, xảy ra đồng lọat sau vài giờ, cá thường ít hoạt động nên cịn gọi là bệnh ngủ. Bệnh thường xảy ra vào đầu mùa mưa (tháng 4 đến tháng 6), ở mọi lứa tuổi và cỡ cá, gây chết từ rải rác đến hàng loạt nếu khơng xử lý kịp thời. Thường cá nhỏ chết nhiều hơn cá lớn. Tỷ lệ
chết từ 60-70%. Qua khảo sát cho thấy bệnh này xảy ra ở 7/15 hộ khảo sát (46,7%), trong đĩ 4 hộ nuơi ao và 3 hộ nuơi bè. Phịng trị bằng cách ngâm nước muối với nồng độ 3-7‰ trong 12 giờ sau 2-3 ngày hoặc thay 70% nước, bĩn vơi nâng pH thì bớt bệnh.
Lở loét: Thân bị ghẻ trĩc, lở loét, trầy da, đốm đỏ, cá bơi lờđờ, bỏăn. Bệnh xảy ra
ở mọi lứa tuổi với kiểu chết rải rác. Bệnh xảy ra 7/15 hộ nuơi (46,7%), trong đĩ xảy ra ở các hộ nuơi cá trong bè là 4 hộ và 3 hộ ở cá nuơi ao. Nguyên nhân của bệnh theo người nuơi là do mơi trường nước xấu, cá bơi va chạm vào nhau gây tổn thương là cơ hội cho các mầm bệnh phát sinh gây lở loét, nếu gặp trường hợp cá
đang suy yếu thì bệnh sẽ nặng hơn. Dùng formol với nồng độ 5 ml/100 lít nước hết bệnh sau 3 ngày, hoặc tắm muối 1,5 kg/20 lít nước hoặc cho ăn kháng sinh Oxytetracyclin, cĩ thể ngâm Tetracycline trong hồ 1-2 viên/20 lít nước.
Phù mang: mang cĩ mủ, các sợi mang dính lại với nhau, nhiều nhớt, nhạt màu và hoại tử làm cho cá khĩ thở nên dễ xảy ra chết hàng loạt với tỷ lệ 60-70%, bệnh thường xảy ra vào mùa lạnh. Trong các hộ khảo sát cĩ 5/15 hộ (33,3%) cĩ bệnh này, xảy ra ở 3 hộ nuơi bè và 2 hộ nuơi ao. Sử dụng đồng sunfat 2,5 ppm tắm trong hồ, sục khí mạnh bệnh sẽ khỏi sau 24 giờ. Cĩ thể dùng muối để tắm hoặc formol, xanh malachite.
ðốm trắng: Trên da cĩ những đốm trắng. Bệnh xảy ra ở mọi lứa tuổi cá, gây cho cá khĩ chịu nhưng khơng gây chết. Bệnh xảy ra ở 2/15 hộ nuơi (13,3%) trong đĩ 1 hộ nuơi ao và 1 hộ nuơi bè. Các hộ chữa trị bằng cách dùng muối để tắm hoặc formol, hoặc xanh malachite.
ðường ruột: Bụng cá bị chướng to, cá bắt đầu chán ăn rồi bỏăn hồn tồn sau 3-4 ngày bị chết. Thường chết rải rác với tỉ lệ dưới 5%. Bệnh xảy ra ở mọi tuổi và cỡ
cá, gặp ở 1/15 hộ nuơi (chiếm 6,7%). Chữa trị bằng cách cho ăn kháng sinh Vime- ciprocin 500 g/300 kg cá trộn với thức ăn.
Theo người nuơi, những trở ngại lớn trong nghề nuơi cá cảnh hiện nay là nguồn nước và thị trường.
Bảng 1: Các triệu chứng thường gặp ở cá Koi
Triệu chứng Tỷ lệ Tỷ lệ (%) Tuột nhớt 7/15 46,7 Lở loét 7/15 46,7 Phù mang 5/15 33,3 ðốm trắng 2/15 13,3 ðường ruột 1/15 6,7
4.2. Kết quả phân lập tác nhân gây bệnh
Các tế bào EPC và KF-1 được nuơi cấy trong chai 25 cm2, sử dụng mơi trường L- 15, bổ sung 10% FBS và kháng sinh, kháng nấm ở 200C. Tế bào mọc đầy chai sau 1 ngày nuơi cấy đối với tế bào EPC và 2-3 ngày nuơi cấy đối với tế bào KF-1. Các tế bào sau khi mọc đầy chai nuơi cấy được nuơi cấy trong đĩa nhựa 24 giếng
để phân lập virus. Mẫu cá với các dấu hiệu điển hình như ít hoạt động, xuất huyết vây, sưng hậu mơn, mang nhạt, tưa, hoại tử…được sử dụng để phân lập virus. Dịch lọc của các mẫu nội tạng (thận, lách, gan, não) được gây nhiễm vào 2 dịng tế
bào KF-1và EPC và theo dõi tác động bệnh lý tế bào (Cytopathic effect – CPE) hàng ngày.
Trên các mẫu đối chứng: khi cấy chủng SVCV, biểu hiện CPE quan sát được trên tế bào EPC sau 3-5 ngày gây nhiễm. Lớp tế bào bị phân giải, các tế bào teo nhỏ và từ từ bị dung giải hồn tồn sau một thời gian. ðối với chủng KHV, CPE quan sát thấy chậm hơn, sau 8-10 ngày gây nhiễm. Sự xâm nhiễm của KHV tạo ra những lỗ
khơng bào trên tế bào KF-1.
Hình 4: Tế bào EPC lớp đơn Hình 5: Tế bào KF-1 lớp đơn
Hình 6: CPE trên tế bào EPC khi gây nhiễm SVCV: lớp tế bào bị rách, tế bào teo nhỏ
Hình 7: CPE trên tế bào KF-1 khi gây nhiễm KHV: những khơng bào trong tế
bào
Hai chủng SVCV và KHV được gây nhiễm trên tế bào EPC và KF-1 trong đĩa 24 giếng. Quan sát biểu hiện bệnh lý tế bào sau thời gian 1-2 ngày vừa đủ để virus xâm nhiễm vào tế bào. Cốđịnh tế bào bằng aceton.
Hai loại kháng thể đơn dịng đặc hiệu của KHV và SVC (KHV-specific monoclonal antibody và SVC- specific monoclonal antibody). Sau đĩ ủ với cộng hợp peroxidase từ globulin miễn dịch ở dê kháng đặc hiệu với globulin miễn dịch
ở chuột (kháng thể thứ cấp). Phản ứng màu được thể hiện nhờ sự kết hợp giữa men peroxidase với hỗn hợp cơ chất tạo màu AEC/chất nền tạo nên màu đỏ gạch xuất hiện sau vài phút ở những vị trí virus tăng sinh.
Hình 8: Tế bào EPC bình thường khơng bắt màu
Hình 9: Những tế bào EPC nhiễm SVCV bắt màu đỏ gạch
4.2.1.3. Kết quả phân lập SVCV và KHV:
Qua 15 đợt thu mẫu khi cá bị bệnh, với biểu hiện tưa đuơi, vây, loét gốc đuơi, mang hoại tử, xuất huyết các gốc vây và cĩ dịch vàng trong xoang bụng bao gồm 118 mẫu, khơng quan sát thấy CPE do nhiễm SVCV và KHV trên tế bào.
ðối với mẫu cá koi cĩ biểu hiện bình thường được thu ngẫu nhiên theo tỷ lệ trên quần đàn của các trại ở tại các quận, huyện gồm Củ Chi, Hĩc Mơn, quận 12 và Quận 9 tổng cộng 237 mẫu đủ kích cỡ từ cá giống đến cá bố mẹ trong 2 đợt tháng 7 và tháng 12 năm 2007 đều cho kết quả âm tính cả 2 loại virus SVC và virus KHV.
4.2.2. Kết quả phân lập vi khuẩn
Mẫu được thu vào thời điểm cá bệnh. Tất cả các mẫu được thu từ cá bệnh sau khi chuyển lên bể 3-5 ngày. Cá cĩ hiện tượng nằm đáy, bơi lờđờ, thân xuất huyết hoặc khơng, mang hoại tử nặng, các sợi mang cĩ tiết nhiều nhớt và dính lại. Quan sát nội tạng cho thấy thận và lách bình thường, một số trường hợp lách bị sưng. Mẫu kiểm tra vi khuẩn được lấy trực tiếp từ gan, thận và mang.
Flexibacter columaris cĩ hình dạng khác biệt so với các loại vi khuẩn khác: dài, mảnh, khơng roi, chuyển động theo dạng trượt. Theo Sniesco (1981), việc chẩn
đốn vi khuẩn này cĩ thể dựa vào việc quan sát vi khuẩn từ vết phiết tươi mẫu mang hoặc các kỹ thuật nhuộm khác, đồng thời, do F. columnaris khơng mọc trên mơi trường dinh dưỡng thường sử dụng cho nuơi cấy vi khuẩn (thạch máu, BHIA) vì vậy kỹ thuật soi tươi và nhuộm Giemsa được sử dụng để xác định sự hiện diện của vi khuẩn này.
Những trường hợp cá bị bệnh cĩ biểu hiện đặc trưng, vi khuẩn sợi quan sát thấy rất nhiều trên mẫu soi tươi của mang và nhớt, tuy nhiên mật độ vi khuẩn ở dịch nhớt thường thấp hơn mang. Khơng thấy cĩ sự hiện diện của vi khuẩn này trên lách và thận. Vi khuẩn cĩ dạng sợi rất mảnh, kích thước chiều dài 4- 5µm, khơng roi, di động bằng cách trượt.
Bảng 2: Kết quả phân tích vi khuẩn trên cá Koi
Vi khuẩn Số mẫu nhiễm/ tổng số mẫu Tỷ lệ (%) F. columnaris 40/40 100 A. hydrophila 46/52 90 A. caviae 1/52 1,9 A. sobria 1/52 1,9 Aeromonas sp. 5/52 9,6 A. veroni 2/52 3,8 Vibrio cholerae 3/52 5,7
F. columnaris gây bệnh ở bện ngồi, trên mang, vây và da, khơng thấy sự hiện diện của vi khuẩn trên các cơ quan nội tạng (thận. lách).
Bảng 3: Kết quả phân tích F. columnaris bằng kỹ thuật nhuộm Giemsa
Loại mẫu Mẫu nhiễm F. columnaris/ tổng số mẫu Tỷ lệ (%) Mang 40/40 100 Nhớt 7/9 77,7 Lách 0/20 0 Thận 0/20 0
Do vi khuẩn khĩ mọc trên mơi trường rắn, thậm chí kể cả mơi trường chuyên biệt Cytophaga, do đĩ F. columnaris được nuơi trong mơi trường lỏng L-15, bổ sung 10% FBS. Vi khuẩn mọc chậm, thường dính chùm hoặc thành chuỗi.
Hình 10: Vi khuẩn F. columnaris, nuơi
trong mơi trường lỏng L-15-FBS.
Hình 11: Vết phiết mang của cá bệnh, nhiều vi khuẩn sợi, nhuộm Giemsa, 1000X.
Khi quan sát mẫu mơ học của mang cho thấy các tơ mang bị hoại tử nặng.
Hình 12: Mang cá bệnh bị phân hủy
F. columnaris là vi khuẩn cĩ khả năng tiết ra enzyme phân giải protein, vì vậy khi xâm nhiễm vào mang và thân, vi khuẩn gây cho mang bị thối rữa hoặc hoại cơ, làm cá khơng hơ hấp được nên thường nổi lờ đờ trên mặt nước hoặc các vùng cĩ nhiều khơng khí (Sanna và cs., 2002). Trên thân khi bị nhiễm vi khuẩn nặng sẽ xảy ra hiện tượng thối đuơi, mịn vây đồng thời kèm theo các biểu hiện xuất huyết. Vi khuẩn đặc biệt phát triển mạnh trong điều kiện nuơi kém hoặc thức ăn dư thừa làm ơ nhiễm nước, nồng độ nitrite cao, hoặc khi nuơi với mật độ cao, nồng độ oxy hịa tan thấp.
Hình 13: Cá Koi xuất huyết các vây, hoại tử
gốc vây đuơi.
Hình 14: Mang cá Koi bị hoại tử, vây đuơi bị xuất huyết, ăn mịn.
Hình 15: Mang tưa - Cá Koi Hình 16: Mang cá chép bị xuất huyết, tiết nhớt, các sợi mang dính lại
Qua quan sát vết phiết tươi mẫu mang cho thấy 100% (40/40 mẫu) cá cĩ nhiễm vi khuẩn sợi trên mang. ðồng thời tần xuất bắt gặp A. hydrophila trên các mẫu cấy từ
mang và vết loét khá cao, trên tổng số 52 mẫu cá bệnh phân lập được vi khuẩn A. hydrophila với tỷ lệ cao nhất 90% (46/52 mẫu), kế tiếp là vi khuẩn Aeromonas sp.
9,6% (5/52 mẫu). Ngồi ra cịn một số chủng khác như V. cholerae 5,7% (3/52
mẫu), Aeromonas veroni 3,8% (2/52 mẫu), và thấp nhất với tỷ lệ 1,9% (1/52 mẫu)
đối với các vi khuẩn Aeromonas caviae, Aeromonas sobria.
Flexibacter sp. được biết đến là vi khuẩn gây bệnh trên mang (hay cịn gọi là bệnh trụ, bệnh columnaris). Bệnh lần đầu tiên được cơng bố bởi Davis vào năm 1922 và
được xem là một trong những bệnh vi khuẩn phổ biến nhất trên cá nước ngọt. Bệnh xảy ra trên cá nheo, cá vàng và cá chép Koi. Năm 1944, Ordal và Rucker lần
trong những trường hợp mơi trường bị thay đổi như nhiệt độ cao (> 200C), mật độ
nuơi cao, chất lượng nước kém, hàm lượng nitrite cao hoặc khi lượng chất hữu cơ
dư thừa trong nước cao, hàm lượng muối trong nước cao sẽ làm tăng độc lực của vi khuẩn dẫn đến cá bị bệnh và chết với tỷ lệ cao.
4.2.3. Kết quả phân tích ký sinh trùng
Các mẫu cá được kiểm tra ký sinh trùng trên mang, nhớt thân, vây, ruột. Phần lớn các ký sinh trùng quan sát được là sán lá đơn chủ, ngồi ra cịn cĩ trùng bánh xe ký sinh nhiều trên thân.
Bảng 4: Kết quả kiểm tra ký sinh trùng trên cá Koi
Cường độ nhiễm STT Tên ký sinh trùng ðợt Cơ quan ký sinh Tỉ lệ
nhiễm % Min-max Trung bình
1 Gyrodactylus sp. ðợt 2 Mang 100 2-121 64,5 Mang 66,67 11-70 25,0 ðợt 3 Nhớt thân 33,33 1-1 0.33 ðợt 4 Mang 100 6-14 8,80 ðợt 5 Mang 100 2-117 32,5 ðợt 6 Mang 100 2-22 10,1 ðợt 11 Mang 50 1-2 0,47 2 Dactylogyrus extensus ðợt 12 Mang 8,33 2-200 16,67 Nhớt thân 20 0-6 1,20 ðợt 4 Vây 20 0-6 1,20 Nhớt thân 100 30-431 117,37 Vây 100 12-194 56,17 3 Trichodina multibilis ðợt 5 Mang 100 2-8 3,0 4 Trichodina nobilis ðợt 3 Nhớt thân 33,33 0-1 0,33 ðợt 5 Mang 16,67 0-8 1,33 5 Centrocestus formasanus ðợt 11 Mang 16,67 0-1 0,10 ðợt 3 Mang 33,33 0-2 0,67 6 Ichthyoph sp. ðợt 4 Vây 40 2-4 1,20
Trong các mẫu phân tích, Dactylogyrus extensus cĩ tần số xuất hiện nhiều nhất ở
6/12 đợt thu mẫu với cường độ nhiễm trung bình cao nhất 32,5 sán/cung mang.
Gyrodactylus sp. ký sinh trên mang với cường độ nhiễm trung bình cao hơn (64,50 sán/cung mang), tuy nhiên tần xuất bắt gặp ký sinh trùng này thấp (1/12 đợt).
Ngồi ra cịn cĩ Centrocestus formasanus với cường độ nhiễm trung bình 1,33 sán/ cung mang. Trên nhớt thân, Trichodina multibilis hiện diện với cường độ
nhiễm trung bình cao nhất 117,37 trùng/ thị trường, Trichodina nobilis 0,33
trùng/thị trường và Ichthyophthirius sp. 1,20 trùng/thị trường. Tuy nhiên với cường độ nhiễm thấp, các loại ký sinh trùng này khơng cĩ khả năng gây chết cá
Gyrodactylus sp. Dactylogyrus extensus
Centrocestus formasanus
Trichodina multibilis Trichodina nobilis
Ngồi ra, kết quả kiểm tra ký sinh trùng trên cá koi vào 2 đợt: tháng 12 năm 2007 và tháng 4 năm 2008 cho thấy cĩ sự hiện diện của bào tử trùng 2 cực nang
Myxobolus sp., Henneguya sp. ký sinh trên mang cá với tỷ lệ khoảng 13%.
Bảng 5: Kết quả kiểm tra bào tử trùng trên cá Koi
ðợt Ký sinh trùng Tỷ lệ nhiễm Cường độ nhiễm
Myxobolus sp. 12/2007 Henneguya sp. 20/145 (13%) + đến ++ Myxobolus sp. + đến +++ 4/2008 Henneguya sp. 10/80 (12,5%)
Hình 18: Cá nhiễm bào tử trùng Hình 19: Bào tử trùng 2 cực nang
Bào tử trùng là tác nhân gây bệnh khá nguy hiểm trên cá nước ngọt, mặc dù khơng gây chết khi cá nhiễm ở cường độ thấp nhưng bào nang nhờ cĩ vách rất dày nên cĩ