+ Lactobacillus sp.
+ Bacillus subtilis
+ Nấm Linh chi
Do phịng thí nghiệm Cơng nghệ biến đổi sinh học cung cấp
- Các hĩa chất, dụng cụ và máy mĩc tại Viện Sinh học nhiệt đới.
- Enzyme cellulase thương phẩm cĩ tên thương mại là celluclast của hãng Novo - Đan Mạch.
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.1. Nội dung 1. Nghiên cứu hình thái; các đặc điểm sinh lý, sinh hĩa của vi sinh vật sử dụng sử dụng
2.2.1.1. Nghiên cứu hình thái; các đặc điểm sinh lý, sinh hĩa của Lactobacillus sp.
Quan sát hình thái bằng phương pháp nhuộm Gram|4, 5|
Nguyên tắc:
Dựa trên khả năng bắt màu của tế bào với thuốc tím kết tinh (crystal violet) và iod mà vi khuẩn chia làm 2 nhĩm khác nhau là:
Vi sinh vật cĩ màu tím đậm là Gram dương. Vi sinh vật cĩ màu hồng, đỏ nhạt là Gram âm.
Cách tiến hành: - Làm vết bơi trên lame
- Nhỏ dung dịch Crystal violet thấm ướt hết giấy lọc, để yên từ 30 giây - 1 phút, rửa trơi thuốc nhuộm dư với nước.
- Nhỏ dung dịch Lugol, để 30 giây, rửa lại nhẹ nhàng với nước.
- Tẩy màu bằng cồn 96o từ 15-20 giây: giữ phiến kính ở gĩc nghiêng nhỏ và cẩn thận nhỏ giọt cồn cho cồn chảy ngang qua vết bơi cho đến khi khơng thấy vết thuốc nhuộm chảy theo. Ngay lập tức rửa vết bơi lại với nước.
- Phủ hồn tồn vết bơi với safranin và để yên trong vịng 30 giây. Rửa với nước. - Thấm khơ phiến kính với giấy thấm. Khi phiến kính khơ hồn tồn, quan sát dưới kính hiển vi với vật kính dầu x100.
Phương pháp định tính acid lactic
Nguyên tắc:
- Khi tác dụng với acid lactic, thuốc thử Ufermen sẽ đổi màu từ xanh tím sang màu vàng.
Cách tiến hành:
- Chuẩn bị khoảng 5 ml mơi trường dinh dưỡng, cấy vi khuẩn lactic vào.
- Nuơi cấy ở nhiệt độ phịng khoảng một ngày. Sau đĩ cho dịch lên men phản ứng với thuốc thử Ufermen.
- Chuẩn bị các ống nghiệm chứa các thành phần như sau:
Ống 1: 3 ml dịch mơi trường, 1 ml thuốc thử Ufermen.
Ống 2: 3 ml dịch lên men, 1 ml thuốc thử Ufermen.
Ống 3: 3 ml acid lactic 98%, 1 ml thuốc thử Ufermen. - Quan sát và nhận xét sựđổi màu của thuốc thử.
Phương pháp định lượng acid lactic |24|
Nguyên tắc:
Acid tổng được đo bằng cách chuẩn độ với NaOH 0,1M; thêm 1-2 giọt phenolphtalein 1% làm chất chỉ thị. Kết quả % acid lactic được tính theo cơng thức:
mmẫu x 1000 x D 90: trọng lượng phân tử acid lactic (g)
D: độ pha lỗng
Cách tiến hành:
Cân 10g mẫu hịa tan vào 90ml nước cất. Thêm 1-2 giọt phenolphtalein 1%. Chuẩn độ với NaOH 0,1M.
* Độ Therner
Một độ Therner tương đương một ml NaOH 0,1N dùng để chuẩn độ 100ml nguyên liệu.
Các đặc tính sinh hĩa của vi khuẩn Lactobacillus.sp |22|
- Oxydase (-) - Catalase (-) - Nitratase (-) - Lên men glucose