Nguyên tắc:
Hoạt tính enzyme amylase được xác định theo phương pháp Smith và Roe (1966). Hoạt tính amylase biểu thị khả năng amylase xúc tác thủy phân tinh bột đến dextrin trong 1 phút ở 50oC và được thể hiện bằng sốđơn vị của enzyme đĩ trong một gam mẫu. Khi phản ứng thủy phân tinh bột xảy ra, lượng tinh bột cịn lại chưa bị phân hủy sẽ tạo phản ứng với iod và được đo bằng máy so màu quang học.
Dụng cụ và hĩa chất: Máy đo quang phổ. Bểổn nhiệt. Dung dịch đệm phosphate (pH 6,2) Dung dịch tinh bột 1% Dung dịch Lugol Dung dịch HCl 1N Dung dịch NaCl 3% Tiến hành:
Dùng các ống nghiệm cĩ đánh dấu sẵn và tiến hành cho vào các ống nghiệm các dung dịch và hĩa chất
Bảng 2.2. Bố trí thí nghiệm định lượng enzyme amylase
Ống chuẩn Ống thử
1 ml nước cất 1 ml dịch enzyme các mẫu 1 ml đệm phosphate pH 6.2 1 ml đệm phosphate pH 6.2 1 ml dung dịch tinh bột 1% 1 ml dung dịch tinh bột 1% 0,5 ml dung dịch NaCl 3% 0,5 ml dung dịch NaCl 3%
Đem ủ ở nhiệt độ 50oC trong 30 phút, sau đĩ cho mỗi ống 1 ml dung dịch HCl 1N để kiềm hãm sự hoạt động của enzyme. Cho nước cất đến 10 ml mỗi ống. Cho tiếp một giọt dung dịch Lugol vào mỗi ống. Đem đo mật độ quang ở bước sĩng 595 nm.
Đơn vị hoạt tính của enzyme amylase được tính theo cơng thức:
a: mật độ quang học của ống chuẩn. L: hệ số pha lỗng
b: mật độ quang học của ống thử. m: trọng lượng (g) hoặc thể tích (ml) mẫu. C: lượng tinh bột ban đầu tham gia phản ứng (10 mg).
UI = (a-b) × C × L a × t × m