3. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.2.Các phương pháp ngoài ựồng
3.3.2.1. Phương pháp bố trắ thắ nghiệm chậu vại
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo khối ngẫu nhiên hoàn chỉnh RCB với 3 lần nhắc lại, mỗi dòng 27 câỵ Các dòng cây lai soma và các dòng Ộbố mẹỢ sau nuôi cấy in vitro 4 tuần ựược trồng trong chậu vại và ựặt trong ựiều kiện nhà màn ựể theo dõi cũng như ựánh giá các ựặc tắnh sinh trưởng, phát triển, năng suất và khả năng kháng virus. Theo dõi ựịnh kỳ 2 tuần/lần.
3.3.2.2. Phương pháp ựánh giá tắnh kháng virus bằng lây nhiễm nhân tạo với virus PVY theo Dr Jorg Schubert Ờ Viện Nghiên cứu chọn tạo giống cây trồng Ờ đức)
- Dùng bột carborundum (silicon carbide, Aldrich 357391) chà nhẹ lên lá non của các cây thuốc lá (Nicotiana tabacum).
- Nghiền khoảng 20mg nguyên liệu lá nhiễm bệnh ựông khô trong một cối chày sứ.
- Bổ sung khoảng 2 Ờ 3ml dung dịch Na Ờ phospate 50 mM (pH= 7.0) với một lượng nhỏ carborundum, ựồng nhất dung dịch.
- Dùng que bông sát nhẹ dịch chiết virus lên lá cây thuốc lá theo chiều từ cuống lá ựến ựỉnh lá.
- Rửa sạch lá ựã lây nhiễm bằng cách phun nước sạch.
- Lây nhiễm mỗi dòng 6 cây, lây trên lá ựang phát triển tốt. Lây vào lúc chiều mát, thời gian lây nhanh (khoảng 15 phút) ựể ựảm bảo khả năng lây nhiễm virus.
- Sau khi lây nhiễm quan sát triệu chứng biểu hiện của từng dòng và tắnh tỷ lệ phần trăm số cây không nhiễm /tổng số cây lây nhiễm.
3.3.2.3. Phương pháp xử lý kết quả thắ nghiệm
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 33