4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1.2. Xác ựịnh con lai soma bằng phương pháp Isozyme
Có nhiều phương pháp ựể xác ựịnh con lai dị nhân, trong ựó con ựường có khả năng nhất ựể nhận biết thể lai mục tiêu là việc so sánh các protein thực vật ựặc trưng cho mỗi kiểu gen. Cơ sở của phương pháp là ựiện di protein, rồi nhận biết chúng thông qua sự nhuộm mầu các isozym, dấu hiệu thể hiện là các vạch băng trên gel. Các kiểu gen khác nhau theo quy luật sẽ thể hiện sự
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 35
sai khác trên các phổ Ộisozym mẹỢ, sau khi dung hợp tế bào trần của 2 dòng khoai tây có phổ Ộisozym mẹỢ khác nhau thì con lai sẽ có phổ isozym là sự cộng lại phổ isozym của cả hai dòng Ộbố mẹỢ.
Các mô khác nhau hoặc cùng một loại mô có thể chứa những enzym giống nhau nhưng thực tế không phải là isozym. Hiện nay, nhiều tác giả ựịnh nghĩa isozym là Ợcác protein khác nhau với cùng một hoạt ựộng enzymỢ. Các genotype khác nhau theo quy luật sẽ thể hiện sự sai khác trên các phổ isozym mẹ, sau khi dung hợp tế bào trần con lai sẽ có phổ isozym là sự cộng lại của phổ isozym cả hai Ộbố mẹỢ. Vì vậy phương pháp isozym thể hiện tắnh hữu hiệu trong xác ựịnh con lai somạ Qua ựó sẽ dễ dàng nhận biết ra thể lai mục tiêụ
Kết quả nghiên cứu của Nguyễn Văn Mùi (1995) cho biết sử dụng phương pháp ựiện di và nhuộm màu isozym peroxidaza (Vallejos, 1983) và isozym esteraza (Shaw và Prassad, 1970) có thể xác ựịnh ựược con lai hetezygous tái sinh sau dung hợp tế bào trần cây khoai tâỵ
để xác ựịnh cây lai soma khoai tây, nhiều tác giả ựề xuất và sử dụng các hệ thống isozym sau: Esteraza, peroxidaza, superoxiđisutaza, malatdehydrogenaza, lactat-dehydrolazạ.. Trong ựó hai loại isozym phổ biến esteraza và peroxidaza thường ựược sử dụng ựể xác ựịnh con lai soma khoai tâỵ Esteraza ựược hiểu là enzym xúc tác cho phản ứng thủy phân este của axit cacbonic, có ba nhóm chắnh: arylesteraza, aliesteraza và cholinesterazạ
Dựa trên các cơ sở trên, chúng tôi tiến hành nghiên cứu phân tắch hệ isozym esteraza và peroxidaza của các dòng tái sinh so với Ộbố mẹỢ nhằm xác ựịnh con lai soma heterozygous.
Kết quả phân tắch isozym esteraza và peroxidaza cho thấy cả 4 tổ hợp dung hợp không có tổ hợp nào có thể xác ựịnh rõ ràng con lai heterozygous bằng phương pháp nàỵ Nguyên nhân là do hai phổ isozym của dòng ỘbốỢ và dòng ỘmẹỢ không có sự sai khác rõ rệt ựể có thể tìm ra sự tổ hợp phổ isozym của con lai tái sinh.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 36
So sánh kết quả của thắ nghiệm này với các thắ nghiệm của các tác giả trước ựây ựã tiến hành có thể cho thấy ảnh hưởng rõ rệt của các kiểu genotype khác nhau ựược chọn làm dòng Ộbố mẹỢ ựể dung hợp tế bào trần. Với các dòng Ộbố mẹỢ có sự ựa hình rõ rệt thì sự tổ hợp phổ isozym của các thể lai là rõ ràng: chỉ với hai enzym esteraza và peroxidaza, trong 13 tổ hợp ựem xác ựịnh thì chỉ có duy nhất 2 tổ hợp H88 1500/12+ H88 1512/4 và H88 1500/12+ H88 1512/28 là không thể xác ựịnh con lai bằng hệ 2 enzym này (Nguyễn Quang Thạch, 1993). Trong khi ựó, cả 4 tổ hợp lai A15+A56, A15+B208, A16+B208, B186+B208 ựều không thể xác ựịnh ựược bằng hệ 2 enzym khá nhậy nàỵ
Hình 4.2. Hình ảnh xác ựịnh con lai soma bằng isozym với hai hệ enzym khác nhau
Chú thắch: P1-Dòng khoai tây nhị bội ỘbốỢ;P2-Dòng khoai tây nhị bội ỘmẹỢ
H1 H6: Các cây lai tứ bội
A Ờ Sử dụng hệ enzym Esteraza; B- Sử dụng hệ enzym peroxidaza
P1 P2 H1 H2 H3 H4 B H5 H4 H3 H2 H1 P1 P2 B P1 P2 H1 H2 H3 H4 H5 H6 A P1 P2 H1 H2 H3 H4 H5 H6 P1 P2 H1 H2 H3 H4 A A
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 37