Các xét nghiệm khì máu, điện giải đồ, Interleukin-6, cortisol, glucose, công thức máu, chức năng đông máu được làm khi bệnh nhân nhập viện để đánh giá tính trạng nặng của bệnh nhân khi chưa được can thiệp.
Bệnh nhân được thông khì nhân tạo ngay lập tức, hồi sức về huyết động và khi có kết quả các xét nghiệm sẽ điều chỉnh ngay. Tiếp tục làm lại tất cả các xét nghiệm sinh hóa, huyết học hằng ngày để có kế hoạch điều chỉnh nhằn hồi sức bệnh tốt hơn.
2.3.4.1. Đo điện giải đồ bằng máy Rapid point hoặc Medica
2.3.4.2. Đo khí máu động mạch bằng máy tự động Rabid do Mỹ sản xuất
Hình 2.8. Máy phân tích khí máu, điện giãi đồ Rapid point
2.3.4.3. Công thức máu đo trên máy đếm tế bào máu tự động Sysmex- 800i (Nhật Bản)
Xét nghiệm công thức máu [106].
Tại Khoa xét nghiệm trực thuộc Trung tâm Huyết học Truyền máu miền Trung phân tìch tế bào máu trên máy đếm tự động. Nguyên lý đếm tế bào như sau:
Cho các tế bào đã được pha loãng đi qua một bộ phận đếm (có thể là dòng điện một chiều trong các máy theo nguyên lý điện trở kháng hay tia laser dùng trong các máy quang học) như một dòng tế bào. Khi tế bào đi ngang qua thí dòng điện hay tia laser sẽ biến đổi và được ghi lại bằng một bộ phát hiện. Sự biến đổi và biên độ của sự biến đổi này sẽ cho biết số lượng và kìch thước tế bào. Có hai nguyên lý, nguyên lý trở kháng và nguyên lý quang học.
+ Nguyên lý trở kháng:
Tế bào máu được pha loãng trong dung dịch điện phân. Sau đó tế bào được đi qua một lỗ nhỏ. Một dòng điện một chiều được đặt giữa hai điện cực platin ở hai phìa.
Ví tế bào máu được coi như không dẫn điện nên khi một tế bào đi ngang qua lỗ sẽ làm giảm độ dẫn điện tức thời, dẫn đến thay đổi hiệu điện thế
giữa hai điện cực. Các xung thay đổi này có thể đếm được và đo được cường độ. Số lượng xung thể hiện số lượng tế bào, độ lớn của mỗi xung thể hiện kìch thước của tế bào. Trung bính độ lớn của mỗi xung là kìch thước trung bính của tế bào (MCV).
Độ chình xác của kỹ thuật được cải thiện khi xử lý dữ liệu, loại bỏ những xung sai lệch. Hệ thống dòng chảy được cải tiến để đảm bảo vị trì ở giữa của tế bào khi qua lỗ (nguyên lý tập trung thuỷ động học).
+ Nguyên lý quang học:
Khi tế bào qua một vùng được chiếu sáng, ánh sáng sẽ bị phản xạ, khúc xạ, tán xạ. Các tế bào quang điện sẽ ghi nhận sự thay đổi của các xung ánh sáng và suy ra số lượng tế bào. Đồng thời, độ lớn của xung ánh sáng tỷ lệ với kìch thước của tế bào. Hệ thống quang học sử dụng để đếm hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu với độ chình xác tương hệ thống theo nguyên lý trở kháng.
+ Phân tìch thông số bạch cầu[11] [67]:
Số lượng bạch cầu được đếm trên mẫu máu được pha loãng với dung dịch làm tan hồng cầu. Số lượng bạch cầu đếm bằng máy tự động có sai số từ 1 đến 3%. Số lượng bạch cầu có thể tăng gỉa tạo do tiểu cầu kết chụm, các sợi fibrin, ngưng tập tiểu cầu do ETDA, hồng cầu có nhân hoặc hồng cầu không bị tan.
Có nhiều máy phân tìch bạch cầu, tuy nhiên nguyên lý nào cũng cho tỷ lệ phần trăm của năm loại bạch cầu là bạch cầu hạt trung tình, bạch cầu lympho, bạch cầu đơn nhân, bạch cầu hạt ưa bazơ và bạch cầu hạt ưa acid. Ngoài ra đối với các máy của hãng Technicon còn có thêm loại bạch cầu lớn, không bắt màu thuốc nhuộm (large unstained cells / LUC) gồm tế bào lympho lớn, tương bào hay tế bào blast [106].
Phân tìch năm loại bạch cầu bằng loại máy đếm tự động cho kết quả rất chìnhxác đối với bạch cầu hạt trung tình và tế bào lympho, sau đó là bạch cầu ưa axìt. Kết quả ìt chuẩn xác hơn đối với tế bào đơn nhân và nhất là bạch cầu ưa bazơ.
Hình 2.9. Máy đếm tế bào máu tự động CELL-DYN 3200
2.3.4.4. Chức năng đông máu đƣợc đo trên máy đông máu tự động STA- Compact
Hình 2.11.Máy phân tích sinh hóa tự động Cobas Olympus 640
2.3.4.5. Định lƣợng glucose máu bằng máy Cobas, Olympus Au 640
- Định lượng glucose máu[1],[3],[61[, [71]. + Nguyên tắc định lượng glucose máu.
Glucose bị phosphoryl hoá bởi hexokinase (HK) với sự hiện diện của Adenosin triphosphat (ATP) và ion magnesium để sản xuất ra glucose- 6 phosphate và Adenosin diphosphate (ADP).
Glucose-6 phosphate dehydrogenase (G-6P-DH) oxy hoá glucose-6 phosphate để hính thành gluconate-6 phosphate và NAD* thành NADH. Sự hấp thu ở 340nm là lượng glucose cần định lượng.
Ta có phương trính phản ứng sau:
Glucose TP HK Mg2+→ Glucose-6 phosphate + AD
Glucose-6 phosphate + NAD+ → Gluconate-6-P + NADH + H+ Thành phần thuốc thử gồm có: Bảng 2.1. Bảng thành phần thuốc thử ATP ≥2 mmol/L NAD+ ≥1,32mmol/L Mg2+ 2,37mmol/L Hexokinase ≥0,59Ku/L G-6P- DH ≥1,58Ku/L
Kết quả được phân tìch tự động trên máy Olympus của Cộng Hoà Liên Ban Đức sản xuất.
Glucose máu ở người lớn: 4,1 - 5,9 mmol/L (74 - 106mg/dL)
2.3.4.6. Định lƣợng cortisol máu
Cortisol được định lượng tự động trên máy Immulite của Hoa kỳ sản xuất[1],[3].
Phương pháp đinh lượng miễn dịch men điện hoá phát quang (chemiluminescent enzyme immunoassay).
Bộ Kit gồm có:
- LCOZ: Dùng để hoà loãng máu của bệnh nhân. Nó được đựng trong một chai bằng thuỷ tinh gồm 25 ml huyết thanh người không có cortisol với chất bảo quản. Ở nhiệt độ 2-8o
C sau khi mở chai có thể giữ được 30 ngày, ở nhiệt độ -20o
C có thể giữ được trong sáu tháng. - LSUBX: Chất điện hoá phát quang - LPWS2: Module rữa dụng cụ thì nghiệm - LKPM: Kit làm sạch dụng cụ thì nghiệm
- LCHx-y: Khoang chứa tách bệnh phẩm (vạch mã)
- LSCP: Những tách đựng bệnh phẩm (có thể dùng được một lần rồi bỏ)
- LSCC: Những nắp đậy tách chứa bệnh phẩm (không bắt buộc) - CON6: Bộ điều khiển nhiều thành phần, ba mức độ.
Trị số của nồng độ cortisol huyết tương buổi sáng là 138-690nmol/L, lúc 16 giờ chỉ bằng nửa buổi sáng, lúc 22 giờ đêm đến 2 giờ sáng 80nmol/L.
2.3.4.7. Định lƣợng interleukin-6 (IL-6) máu [1],[3],[7]
Phương pháp định lượng: Miễn dịch điện hoá phát quang (Chemiluminescent immunometric assay).
Bộ Kit gồm có:
Chai đựng 25 ml dung dịch để pha loãng máu bệnh nhân, không có IL-6. Có thể bảo quản ở nhiệt độ 2 - 8oC trong 14 ngày sau khi mở nắp chai. Ở nhiệt độ -20oC có thể giữ được sáu tháng.
- LSUBX: Chất điện hoá phát quang - LPWS2: Module rữa dụng cụ thì nghiệm - LKPM: Kit làm sạch dụng cụ thì nghiệm
- LCHx-y: Khoang chứa tách bệnh phẩm (vạch mã)
- LSCP: Những tách đựng bệnh phẩm (có thể dùng được một lần rồi bỏ)
- LSCC: Những nắp đậy tách chứa bệnh phẩm (không bắt buộc) - LILCM: Module kiểm tra cytokin
Trị số bính thường của IL-6 là 3,4 - 5,9 pg/ml [1], [3],[59]. + Nguyên lý định lượng IL-6 và cortisol:
Lấy máu xét nghiệm: Phải lấy máu buổi sáng, khi chưa ăn uống gí. Dùng ống nghiệm, kim tiêm, bơm tiêm thật vô khuẩn (tiệt khuẩn khô). Nếu phải buộc dây thắt thí sau khi kim đã vào tĩnh mạch, phải mỡ dây thắt ngay nếu không thành phần máu sẽ thay đổi. Khi bơm máu vào ống nghiệm, nên tháo kim, bơm nhẹ vào thành ống, không cho sủi bọt. Để tránh sai lầm tuỳ trường hợp phải cho thêm vào ống nghiệm một ìt hoá chất chống đông, chống lên men.
Lượng máu lấy thay đổi tuỳ theo xét nghiêm, huyết tương hay máu cần cho mỗi xét nghiệm theo các phương pháp kinh điển. Muốn có một lượng huyết thanh, huyết tương đó, phải lấy máu gấp ba lần sau đó cho lắng hoặc cho thêm chất chống đông rồi quay ly tâm. Với các thiết bị sinh hoá hiện đại số lượng máu cần cho xét nghiệm giảm đi rất nhiều [1],[3].
Trong trường hợp phòng xét nghiệm ở xa, ngoại trừ xét nghiệm glucose, chlo và sắt, chỉ cần gởi huyết thanh cũng được; cứ để máu đông trong ống nghiệm dùng ống hút huyết thanh nổi ở trên cho vào một ống nghiệm vô khuẩn và khô, nút kỹ rồi gởi đến phòng xét nghiệm. Tại Khoa Hoá-Sinh Bệnh viện Trung ương Huế tiến hành định lượng IL-6 và cortisol như sau:
- Lấy 3ml máu bệnh nhân bỏ vào ống nghiệm không có chất chống đông - Để máu 1-2 giờ, máu sẽ tách ra hai phần. Phần trên ống nghiệm là huyết tương phần dưới là huyết cầu.
- Quay ly tâm lạnh ở nhiệt độ 20oC, tốc độ 3000 vòng/phút để tách hoàn toàn huyết tương.
- Đổ huyết tương vào một dụng cụ có mã vạch, cài máy theo mã (code). - Cài họ tên, tuổi bệnh nhân vào rồi cho máy chạy.
- Trong máy đã có sẳn hoá chất để gây phản ứng nhằm định lượng IL-6 hoặc cortisol [1], [3],[59],[81].
Hình 2.12. Hệ thống xét nghiệm miễn dịch tự động Immulite 1000 Máy định lƣợng IL-6 và cortisol máu