Các chất nhuộm phát huỳnh quang:
- Acridin cam (AODC)
- 4’,6-dianodino-2-phenyl-indol (DAPI) - Fluorescein isothiocyanate (FTTC)
Ưu điểm:
- Loại bỏ sai số do các chất vẩn. - Kết quả phản ánh đúng với sinh khối
- Không sử dụng nước cất và nước muối sinh lý để pha loãng mẫu thực phẩm. - Các dung dịch pha loãng mẫu:
+ Saline peptone water (SPW) NaCl:1g
Peptone: 8.5g
Nước cất vừa đủ:1 lít
+ Buffered peptone water (BPW) NaCl: 5g
Peptone: 10g
Hình 3.2: Pha lỗng mẫu
Đối với các mẫu rắn hay bán lỏng: 10g + 90ml dung dịch pha loãng = độ pha
loãng 101 , làm tương tự cho các bước tiếp theo.
Sau đó cấy vào mơi trường
Hình 3.3: Cấy vào mơi trường
3.1.2. Định lượng Coliform bằng phương pháp đếm khuẩn lạc
3.1.2.1. Nguyên tắc
Mẫu đã được đồng nhất được cấy một lượng nhất định lên mơi trường thạch
chọn lọc thích hợp chứa lactose. Sau khi ủ 370C + 10C trong 24 – 48 giờ, đếm số
lượng khuẩn lạc Coliforms điển hình. Xác định lại bằng các phản ứng đặc trưng. Môi trường chọn lọc Coliforms là môi trường chứa lactose, đây là nguồn carbon duy nhất, đồng thời mơi trường cịn chứa muối mật như một tác nhân chọn lọc và các tác nhận chỉ thị như neutral red, crystal violet. Khẳng định các dịng khuẩn lạc đặc trưng bằng mơi trường canh chọn lọc như canh BGBL.
Để tránh các trường hợp không phát hiện được Coliforms do bị tổn thương hay suy yếu do trong quá trình chế biến, bảo quản hay tiếp xúc với môi trường chọn lọc
làm chúng không phát triển thành khuẩn lạc, chúng ta phải phục hồi khả năng hoạt động của Coliforms bằng một môi trường chứa nguồn carbon khác như môi trường tryptone soya agar.
Số lượng Coliforms được xác định bằng số lượng khuẩn lạc điển hình đếm được, hệ số khẳng định và nồng độ pha loãng trước khi cấy mẫu vào đĩa.
3.1.2.2. Mơi trường và hóa chất
- Môi trường Tryptone Soya Agar (TSA)
- Violet Red Bile Agar (VRB)
- Brilliant Green Bile Lactose broth (BGBL)
- EC broth
3.1.2.3. Quy trình phân tích
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});