3. Nội dung nghiên cứu
3.3. KẾT QUẢ TẠO DÒNG VI KHUẨN A tumefaciens MANG CẤU
TRÚC GEN GmDREB2
Sau khi thiết kế thành công plasmid pBI121/GmDREB2 chúng tôi tiến hành biến nạp vào A. tumefaciens bằng phương pháp xung điện. Đây là phương pháp biến nạp cho hiệu quả cao, với thời gian thí nghiệm ngắn. Sản phẩm của quá trình biến nạp được nuôi phục hồi trong LB lỏng 1 giờ và cấy trải trên môi trường LB đặc có chứa 50 mg/l kanamycin và 50 mg/l rifamycin, ở 280C trong thời gian 48 giờ.
480 bp 500bp
Các dòng khuẩn lạc A. tumefaciens được tạo ra nhờ xung điện 2,5 kV chứa Ti-plasmid tái tổ hợp đã được phát hiện bằng phương pháp chọn lọc trên môi trường chứa kháng sinh chọn lọc (kanamycin 50 mg/l và 50 mg/l rifamycin). Chỉ có những khuẩn lạc A. tumefaciens được biến nạp thành công plasmid pBI121/GmDREB2 mới sống được trên môi trường chọn lọc. Để tìm
A. Tumefacien mang gen quan tâm, chúng tôi đã tiến hành kiểm tra bằng phản ứng colony-PCR với cặp mồi đặc hiệu. Chọn ngẫu nhiên 5 dòng khuẩn lạc A. tumefaciens mọc trên đĩa thạch để tiến hành phản ứng colony-PCR. Phản ứng được thực hiện với nhiệt độ gắn mồi 570C, lặp lại 30 chu kỳ. Sản phẩm phản ứng được điện di kiểm tra trên gel agarose 0,8%, kết quả thể hiện trong (Hình 3.11). Kết quả điện di cho thấy trong 5 dòng khuẩn lạc được kiểm tra đều lên 1 băng duy nhất có kích thước khoảng 480 bp. Với kết quả PCR đạt tỷ lệ 100%, có thể khẳng định chúng tôi đã biến nạp thành công vector pBI121/GmDREB2 vào vi khuẩn A. tumefaciens. Các chủng vi khuẩn 1, 2, 3, 4, 5 trên có thể phục vụ cho việc chuyển gen vào thực vật.
Hình 3.11. Hình ảnh điện di sản phẩm colony-PCR từ vi khuẩn A. tumefaciens mang plasmid pBI121/GmDREB2; Giếng 1-5: các dòng vi
khuẩn mang plasmid pBI121/GmDREB2; M: thang chuẩn 1 kb
480 bp 500bp
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ