Ảnh hưởng của nồng độ cơ chất đến hoạt tính chitinase
Nồng độ cơ chất có ảnh hƣởng đến tốc độ phản ứng của enzyme. Khi môi trƣờng có đầy đủ cơ chất thì vận tốc phản ứng tỷ lệ thuận với lƣợng enzyme. Tốc độ phản ứng tối đa khi tất cả enzyme đều kết hợp với cơ chất. Để xác định đƣợc nồng độ cơ chất chitin keo thích hợp cho phản ứng xác định hoạt tính chitinase. Ta xét các nồng độ nhƣ sau 0,01%; 0,05%; 0,1%; 0,5%; 1%; 1,5%; 2% chitin pha trong đệm 0,05M citrat pH6. Sau đó xác định hoạt tính của chitinase.
Xác định nhiệt độ và pH tối ưu
Khi tăng nhiệt độ trong một giới hạn nhất định thì vận tốc phản ứng của enzyme cũng tăng lên. Ở nhiệt độ cao, enzyme sẽ bị biến tính hoặc mất hoạt tính. Còn ở nhiệt độ thấp, hoạt tính của enzyme sẽ giảm nhƣng có thể phục hồi lại đƣợc khi đƣa về nhiệt độ thích hợp [1]. Nhiệt độ tối ƣu đƣợc xác định bằng cách thực hiện phản ứng giữa chitinase và cơ chất (chitin keo 1%) ở các thang nhiệt độ khác nhau từ 250C – 700C.
pH có ảnh hƣởng lớn đến phản ứng enzyme, vì nó ảnh hƣởng đến mức độ ion hóa cơ chất và độ bền của enzyme. Mỗi enzyme có vùng hoạt động tối ƣu ở pH nhất định. Xác định pH tối ƣu bằng cách sử dụng dải pH của các đệm khác nhau: đệm sodium citrate 0,05M (pH 3 – 6), đệm sodium phosphate 0,05M (pH 7 – 8), đệm glycine – NaOH (pH 9 – 10). Cơ chất chitin keo 1% sẽ đƣợc pha trong các đệm này, sau đó cho phản ứng với enzyme và xác định hoạt tính.
Nguyễn Ngọc Mai Cao học sinh K4B
Ảnh hưởng của ion kim loại
Các ion kim loại có tác dụng kìm hãm hoặc hoạt hóa enzyme. Tùy thuộc vào nồng độ của các ion kim loại mà nó tác động đến enzyme khác nhau. Đánh giá ảnh hƣởng của các ion kim loại Ca2+
, Mg2+, Fe2+, Mn2+, K+, Cu2+ lên hoạt tính chitinase. Ủ enzyme với muối của các kim loại này ở nồng độ 1mM trong 1 giờ ở 40
C. Xác định hoạt tính còn lại của chitinase ở nồng độ cơ chất, nhiệt độ và pH tối ƣu.
Nguyễn Ngọc Mai Cao học sinh K4B Chƣơng III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN