SP-L dạng cố định Thời gian phản ứng (h) 0 10 20 30 40 50 No àng đo ä( m g/m l) 0 100 200 300 400 500 Glucose 1-Kestose
Hình 4.16: Khảo sát ảnh hưởng của thời gian phản ứng tổng hợp FOS của chế phẩm Pectinex Ultra S-PL cố định bởi alginate.
Theo hình 4.16 cho thấy thời gian phản ứng để đạt được nồng độ đường khử tiến gần đến cực đại là sau 28h. Hàm lượng glucose sau 28h đạt 135.57 mg/ml. So sánh thời gian phản ứng của chế phẩm cố định và chế phẩm tự do (hình 4.6): thời gian phản ứng của chế phẩm enzyme cố định chậm hơn so với chế phẩm dạng tự do. Điều này do về mặt cấu trúc khơng gian của chế phẩm dạng cố định đã bị che lấp một phần bởi chất mang làm cho sự tiếp xúc của enzyme với cơ chất hạn chế chậm hơn.
4.8. Kết quả phân tích HPLC mẫu FOS sử dụng chế phẩm Pectinex Ultra SP-L cố định cố định
Hàm lượng cơ chất sucrose ban đầu là 58.7% (w/v). Mẫu hỗn hợp phản ứng với chế phẩm Pectinex Ultra SPL cố định sau 36h phản ứng được phân tích để xác định thành phần cĩ trong hỗn hợp. Kết quả phân tích HPLC (bảng 4.14 và hình 4.17) cho thấy hàm lượng đường fructose khơng xuất hiện trong hỗn hợp phản ứng, điều này cho thấy dưới sự tác động của hoạt tính fructosyltransferase của chế phẩm Pectinex làm tăng hiệu quả của phản ứng chuyển gốc fructosyl liên kết với sucrose trong hỗn hợp tạo FOS trong hỗn hợp. Sự khơng cĩ mặt của fructose cịn cho thấy trên nồng độ
73
sucrose cao chế phẩm Pectinex Ultra SP-L biểu hiện hoạt tính fructosyltransferase mạnh hơn hoạt tính thủy phân hydrolase.
Hình 4.17: Sắc ký đồ của FOS và các đường thành phần khác trong sản phẩm thu nhận sử dụng chế phẩm Pectinex Ultra SP-L cố định
Bảng 4.14 : Thành phần sản phẩm FOS và các đường thành phần
sau khi phân tích HPLC.
Sản phẩm Thời gian (phút) Độ cao peak Diện tích peak
FOS 8.768 119736 8188625
Sucrose 9.909 47611 95486
Glucose 12.658 95486 6376325
Hàm lượng sucrose cịn lại trong mẫu là 95mg/ml. Hàm lượng glucose được tạo ra từ phản ứng chuyển gốc fructosyl là 218mg/ml. Kết quả này cho thấy cĩ sự tương đồng với các nghiên cứu của Andrelina M.P Santos (glucose 155mg/ml) và Iraj Ghazi (29- 31% glucose) [11,17].
Theo nghiên cứu của Oscar Fernando Sanchez và cộng sự thì mức độ chuyển hĩa của phản ứng đạt đến 90%, lượng sucrose cịn lại khoảng 8 – 15% [25]. Điều kiện thực nghiệm cho thấy hàm lượng sucrose cịn lại chiếm 17.43% so với lượng sucrose ban đầu.
Hàm lượng FOS tạo ra trong hỗn hợp sản phẩm được xác định theo diện tích peak FOS do điều kiện phân tích HPLC khơng cĩ được chất chuẩn FOS. Lượng FOS xác định được: 279.96 mg/ml. Hàm lượng FOS chiếm 47% (w/w), glucose 37% (w/w), sucrose 16% (w/w) hỗn hợp sản phẩm. So sánh với nghiên cứu của O. F. Sanchez lượng FOS tạo ra chiếm 50% (w/w) cho thấy kết quả thực nghiệm của chúng tơi rất khả quan khi sử dụng chế phẩm Pectinex Ultra SP-L cố định [25].
74
CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ