SP-L tự do
Hoạt tính fructosyltransferase trong chế phẩm Pectinex Ultra SP-L được xác định qua lượng đường khử tạo thành theo phương pháp định lượng hàm lượng đường khử DNS. Mỗi thí nghiệm được bố trí như sau: Sử dụng bình tam giác 10 ml dung dịch sucrose nồng độ 60% (w/v), 0.2 ml chế phẩm Pectinex Ultra SP-L, 1ml dung dịch đệm natri citrate pH = 5.5. Hỗn hợp được thực hiện phản ứng trong bể ủ nhiệt tại nhiệt độ 55oC, thời gian phản ứng 60 phút. Sau phản ứng lấy 500µl hỗn hợp phản ứng thêm 9500µl nước cất, lắc đều và đun sơi cách thủy trong 10 phút để bất hoạt enzyme. Sau đĩ lấy 300µl dung dịch enzyme đã bất hoạt pha lỗng với 2700µl nước cất, thêm vào 1000µl dung dịch thuốc thử DNS và xác định hoạt tính của chế phẩm Pectinex Ultra SP-L ban đầu theo cơng thức (10).
Xác định hàm lượng đường khử ban đầu trong sucrose.
Sử dụng bình tam giác 50ml thêm 10 ml dung dịch sucrose nồng độ 60% (w/v), khơng bổ sung chế phẩm Pectinex Ultra SP-L, 1ml dung dịch đệm natri citrate pH = 5.5. Hỗn hợp được thực hiện phản ứng trong bể ủ nhiệt tại nhiệt độ
46
55oC, thời gian phản ứng 60 phút. Sau phản ứng lấy 500µl hỗn hợp phản ứng thêm 9500µl nước cất, lắc đều và đun sơi cách thủy trong 10 phút để bất hoạt enzyme. Sau đĩ lấy 300µl dung dịch enzyme đã bất hoạt pha lỗng với 2700µl nước cất, thêm vào 1000µl dung dịch thuốc thử DNS và xác định hàm lượng đường khử cĩ trong mẫu. Từ đĩ xác định được hàm lượng đường khử ban đầu cĩ trong mẫu.
Hình 3.2: Phương pháp xác định hoạt tính enzyme fructosyltransferase theo phương pháp định lượng đường khử DNS.
0.2 ml chế phẩm Pectinex Ultra SP-L
Mẫu 10ml dung dịch sucrose 60% (w/v) Phản ứng chuyển gốc fructosyl 1ml dung dịch đệm natri acetate Bất hoạt enzyme Nhiệt độ: 55o C Thời gian: 60 phút Tốc độ lắc: 150rpm Phản ứng DNS Xác định Glucose Hoạt tính enzyme
47
Hoạt tính fructosyltransferase trong chế phẩm Pectinex Ultra SP-L được xác định qua lượng đường khử tạo thành theo phương pháp định lượng hàm lượng đường khử DNS. Mỗi thí nghiệm được bố trí như sau: Sử dụng bình tam giác 10 ml dung dịch sucrose nồng độ 60% (w/v), 0.2 ml chế phẩm Pectinex Ultra SP-L, 1ml dung dịch đệm natri citrate pH = 5.5. Hỗn hợp được thực hiện phản ứng trong bể ủ nhiệt tại nhiệt độ 55o
C, thời gian phản ứng 60 phút. Sau phản ứng lấy 500µl hỗn hợp phản ứng thêm 9500µl nước cất, lắc đều và đun sơi cách thủy trong 10 phút để bất hoạt enzyme. Sau đĩ lấy 300µl dung dịch enzyme đã bất hoạt pha lỗng với 2700µl nước cất, thêm vào 1000µl dung dịch thuốc thử DNS và xác định hoạt tính của chế phẩm Pectinex Ultra SP-L ban đầu theo cơng thức (10).
Xác định hàm lượng đường khử ban đầu trong sucrose.
Sử dụng bình tam giác 50ml thêm 10 ml dung dịch sucrose nồng độ 60% (w/v), khơng bổ sung chế phẩm Pectinex Ultra SP-L, 1ml dung dịch đệm natri citrate pH = 5.5. Hỗn hợp được thực hiện phản ứng trong bể ủ nhiệt tại nhiệt độ 55oC, thời gian phản ứng 60 phút. Sau phản ứng lấy 500µl hỗn hợp phản ứng thêm 9500µl nước cất, lắc đều và đun sơi cách thủy trong 10 phút để bất hoạt enzyme. Sau đĩ lấy 300µl dung dịch enzyme đã bất hoạt pha lỗng với 2700µl nước cất, thêm vào 1000µl dung dịch thuốc thử DNS và xác định hàm lượng đường khử cĩ trong mẫu. Từ đĩ xác định được hàm lượng đường khử ban đầu cĩ trong mẫu.