NƯỚC NÓNG
Các mẫu suối nước nóng ở Bình Châu – Phước Bửu (Bà Rịa – Vũng Tàu) sau khi được lấy được nuôi tích lũy trong môi trường dịch thể CS-TYE ở nhiệt độ 55oC - 60oC, pH trong khoảng từ 7,2-7,6. Dịch nuôi cấy sau đó được pha loãng và cấy ria trên môi trường thạch, ủ ở nhiệt độ 55oC để tiến hành phân lập và làm thuần. Chọn các khuẩn lạc nghi ngờ của vi khuẩn Meiothermus ruber: khuẩn lạc có màu đỏ, hình tròn, bề mặt phẳng trơn láng nhô cao. Quan sát sơ bộ dưới kính hiển vi và tiến hành nhuộm gram để quan sát hình thái tế bào.
A B
Hình 3.1. Khuẩn lạc (A) và hình dáng tế bào (B) vi khuẩn Meiothermus ruber
Vi khuẩn Meiothermus ruber hình que dài, đứng riêng lẻ không xếp thành cụm, không di động, gram âm, có khả năng phát triển ở nhiệt độ từ 45-65oC, pH trong khoảng từ 5,0-9,0. Để khẳng định chính xác chủng vi khuẩn chúng tôi phân lập được chính là vi khuẩn Meiothermus ruber, chúng tôi tiến hành gửi giải trình tự gen 16S ở công ty Nam Khoa và kết quảđược tra cứu trên Blast search. Kết quả cho thấy chủng vi khuẩn chúng tôi phân lập được chính là Meiothermus ruber (phụ lục 1)
3.2. THU NHẬN GEN MÃ HÓA ENZYME TREHALOSE SYNTHASE TỪ CHỦNG VI KHUẨN MEIOTHERMUS RUBER
DNA chủng vi khuẩn Meiothermus ruber sau khi được tinh chế tiến hành phản ứng PCR với cặp mồi pMtreSF và pMtreSR. Việc thiết kế cặp mồi này dựa trên nghiên cứu của Wei và cộng sự (2009) [35]. Cặp mồi này khuyếch đại đoạn gen Tres có chiều dài 2895 bp và có chứa vị trí cắt của enzyme NdeI và EcoRI.
Hình 3.2. Điện di trên gel agarose sản phẩm PCR ( giếng 1: thang chuẩn MassRuler DNA ladder Mix, giếng 2: mẫu dương, giếng 3 mẫu âm)
Kết quảđiện di trên hình 3.2. cho thấy sản phẩm PCR có 1 băng duy nhất có kích thước đúng như dự kiến. Trong khi đó ở mẫu âm, không có tín hiệu. Như vậy cặp mồi đặc hiệu do chúng tôi thiết kế có thể dùng để thu nhận trình tự gen mục tiêu đúng như trình tự lý thuyết.
2895 bp 3000 bp
3.3. TẠO DÒNG GEN MÃ HÓA ENZYME TREHALOSE SYNTHASE VÀO VECTOR pET- 22b