Thông thường, việc nối DNA vào vector không bao giờ thành công hoàn toàn và đặc hiệu nên hỗn hợp nối sẽ có nhiều kết quả nối khác nhau ví dụ như;
DNA nối lẫn nhau, vector tựđóng vòng mà không mang đoạn chèn.. Do đó, sau khi đưa DNA vào tế bào tiến hành nuôi cấy và phân lập các dòng thu được để phát hiện các dòng mang DNA tái tổ hợp. Nhìn chung có một số phương pháp chính như sau: Sử dụng kỹ thuật bổ sung alpha: dựa vào sự hiện diện của β-galactosidase - chịu trách nhiệm thủy phân lactose thành galactose để tế bào có thể sử dụng. Enzyme này có hai đơn vị, bộ gen của tế bào chủ chỉ mã hóa một đơn vị, còn đơn vị thứ hai (đoạn alpha) được mã hóa trên vector và vị trí chèn sẽ nằm trong vùng này. Do đó, nếu vector mang DNA tái tổ hợp thì đơn vị thứ hai của β-galactosidae không được tổng hợp và tế bào sẽ không sử dụng lactose.
Sử dụng sựđề kháng với kháng sinh: vector mang hai gen kháng kháng sinh, vị trí chèn nằm trong một gen kháng kháng sinh. Nếu vector mang DNA tái tổ hợp dòng thu được sẽ mất khả năng đề kháng với một trong hai kháng sinh. Do đó tao có thể sử dụng phương pháp in dấu để phát hiện
Chọn lọc trực tiếp: đây là cách tốt nhất nhưng lại khó thực hiện trên thực tế. Trong phương pháp này, đoạn chèn sẽ mang đến cho tế bào nhận được nó có đặc điểm kiểu hình mà các dòng khác không có và ta có thể dễ dàng nhận ra khi phân lập. ví dụđoạn chèn mang gen kháng kháng sinh.
Lai khuẩn lạc (colony hybridization): áp dụng cho trường hợp đoạn chèn đã biết trình tự. Các khuẩn lạc sau khi phân lập được in dấu trên màng nitrocellulose hay nylon, tế bào trên màng bị phá hủy để lộ bộ vật liệu di truyền. Màng lọc lúc này được cho lai với đoạn dò được đánh dấu tương ứng với đoạn chèn. Nếu khuẩn lạc nào mang đoạn chèn sẽ có tín hiệu, từ vị trí tín hiệu trên màng lọc suy ra khuẩn lạc tương ứng trên hộp thạch ban đầu.
Chương 2:
VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP