Kỹ thuật SMAP là một công nghệ mới nhất đƣợc phát triển bởi các nhà khoa học tại viện công nghệ Riken-Nhật Bản nhằm phát hiện các đột biến trên gen EGFR và KRAS. Nguyên lý cơ bản của kỹ thuật SMAP là : Khuếch đại DNA = Phát hiện đột biến. Để thực hiện đƣợc nguyên lý này kỹ thuật SMAP sử dụng (I) các cặp mồi phát hiện đột biến đƣợc thiết kế bất đối xứng
DNA đích Allele kiểu dại
Allele đột biến
Đoạn dò Scorpion đặc hiệu allele
đặc hiệu allele kiểu dại
đặc hiệu allele kiểu đột biến
Đo mức phát huỳnh quang bằng real-time PCR
Số chu kỳ Số chu kỳ Số chu kỳ
Kiểu dại Kiểu dại : Đột biến Đột biến (1:1)
Các đoạn mồi đặc hiệu allele bắt cặp và kéo dài
nhằm giảm thiểu các khả năng mồi ghép cặp sai với sợi khuôn (II) một loại protein mới với khả năng nhận biết và bám đặc hiệu tại vị trí có sự ghép cặp không tƣơng đồng giữa mồi và khuôn (Taq MutS) ngăn không cho phức hợp mồi-khuôn đƣợc khuếch đại trong phản ứng kéo dài chuỗi. Chỉ những phức hợp mồi-khuôn DNA ghép cặp hoàn mới đƣợc khếch đại nhờ DNA polymerase, tín hiệu của sản phẩm khuếch đại đặc hiệu đột biến đƣợc phát hiện trong hệ thống máy real-time PCR [120].
Thực tế cho thấy một trong những khó khăn của việc áp dụng các kỹ thuật sinh học phân tử nhƣ giải trình tự gen, Scorpion ARMS trong thực tế lâm sàng thƣờng đòi hỏi qua nhiều bƣớc, đội ngũ kỹ thuật viên có kiến thức chuyên sâu về sinh học phân tử, giá thành cao, thời gian phân tích kết quả lâu. Các công trình nghiên cứu áp dụng kỹ thuật SMAP cho thấy kỹ thuật vận hành qua một bƣớc duy nhất ―Khuếch đại DNA = Phát hiện đột biến‖, có độ chính xác cao, thời gian từ khâu tách mẫu đến cho kết quả phân tích đột biến gen rất ngắn : khoảng 30 phút. Đây là một ƣu thế nổi bật của kỹ thuật SMAP so với các kỹ thuật khác nhƣ giải trình tự gen (1-2 ngày), PCR-RFLP (1-2 ngày), Scorpion ARMS (3-4 giờ). Một khi kỹ thuật SMAP đƣợc áp dụng thành công, kỹ thuật mới này sẽ là một công cụ đắc lực giúp các nhà nghiên cứu và lâm sàng Việt Nam hiện thực hóa mục tiêu y học cá thể - khám và chữa bệnh dựa trên tình trạng gen của bệnh nhân.
CHƢƠNG 2
ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU