a) Tách chiết plasmid pET-19b
Plasmid pET-19b đƣợc tách chiết theo phƣơng pháp SDS-kiềm. Plasmid sau khi tách chiết đƣợc điện di kiểm tra trên gel agarose 1% (Hình 3.2, giếng 2). Nồng độ và độ tinh sạch của plasmid sau khi tách chiết đƣợc đo bằng máy Nanodrop® (Bảng 3.2).
Bảng 3.2. Nồng độ và độ tinh sạch của plasmid pET-19b
Mẫu Nồng độ (ng/l) OD260/280
pET-19b 3569 1,89
Kết quả đo cho thấy mẫu plasmid thu đƣợc có nồng độ cao. Giá trị OD260/280 phản ánh độ tinh sạch của mẫu có giá trị là 1,89, giá trị này nằm trong khoảng cho phép (1,8
≤ OD260/280 ≤ 2,0). Nhƣ vậy, plasmid pET-19b đã đƣợc tách chiết để sử dụng cho các
bƣớc dòng hóa tiếp theo.
b) Xử lý plasmid pET-19b bằng enzyme cắt giới hạn
Sau khi tách chiết, plasmid pET-19b đƣợc xử lý tiếp với BamHI và XbaI để chuẩn bị cho chiến lƣợc tạo dòng đầu dính với gen fgf. Sản phẩm cắt đƣợc điện di trên gel agarose 1% (Hình 3.2).
Trên plasmid pET-19b (5717bp) có trình tự nhận biết duy nhất của BamHI ở vị trí 319 và XbaI ở vị trí 437. Plasmid đƣợc xử lý bằng hai enzyme này sẽ đƣợc mở vòng và có kích thƣớc 5599kb. Kết quả điện di cho thấy có vạch DNA nằm giữa vạch thang 5000bp và 6000bp đúng với kích thƣớc pET-19b đƣợc cắt bằng hai enzyme này (Hình 3.2, giếng 3). Nhƣ vậy, chúng tôi đã thu nhận thành công plasmid pET-19b mang đầu dính của BamHI và XbaI.
Hình 3.2. Kết quả điện di kiểm tra plasmid pET-19b
1, Thang DNA 1kb; 2, Plasmid pET-19b; 3, Plasmid pET-19b cắt bằng BamHI và XbaI