* đối với thảo mộc có chứa nicotin (phụ phẩm thuốc lá):
Sau khi sấy khô, cân 20g nguyên liệu vào bình tam giác 500ml, chiết xuất theo 3 phương pháp như sau:
+ Phương pháp chiết xuất 1
Hòa tan 0,7g NaOH vào 150ml nước cất, sau ựó ựổ vào bình tam giác ựã có 20g nguyên liệu ựậy kắn nắp, ngâm trong 12- 24 giờ, tiến hành chiết và lọc phần dịch bằng giấy lọc ựược dịch chiết 1 (DC1). Dịch chiết ựược cho vào lọ ựậy kắn ựể nơi thoáng mát
+ Phương pháp chiết xuất 2
đổ 150ml dung môi chứa 80% MeOH vào bình tam giác ựã có 20g nguyên liệu ựậy kắn nắp, ngâm trong 12-24 giờ, tiến hành chiết và lọc phần dịch bằng giấy lọc ựược dịch chiết 2 (DC2). Dịch chiết ựược cho vào lọ ựậy kắn ựể nơi thoáng mát
+ Phương pháp chiết xuất 3
đổ 150ml dung môi chứa 80% Etanol vào bình tam giác ựã có 20g nguyên liệu ựậy kắn nắp, ngâm trong 12- 24 giờ, tiến hành chiết và lọc phần dịch bằng giấy lọc ựược dịch chiết 3 (DC3). Dịch chiết ựược cho vào lọ ựậy kắn ựể nơi thoáng mát
Các dịch chiết thu ựược cho vào lọ ựậy kắn, bảo quản nơi thoáng mát, tránh ánh sáng trực xạ ựể làm nguyên liệu cho các nghiên cứu tiếp theo
* đối với các loại thảo mộc chứa Saponin và Alkaloid
Các loại thảo mộc gồm bã Trẩu, bã Sở, vỏ quả điều, bã Thanh hao hoa vàng thu về ựược sấy khô ở nhiệt ựộ 40 Ờ 500C trong thời gian 3 giờ, ựể nguộị Sau ựó, tiến hành các phương pháp chiết xuất khác nhau tùy theo mục tiêu xác ựịnh loại hoạt chất có chứa trong các loại thảo mộc. Cụ thể:
cân 100g mỗi loại vào bình nón 500ml, sau ựó ựổ 150ml dung môi MeOH 20% nước ngâm trong 12 -24h, sau ựó lọc phần dịch bằng giấy lọc ựược các dịch chiết. Các dịch chiết từ bã trẩu, bã sở, vỏ quả ựiều, bã thanh hao hoa vàng ựược ký hiệu lần lượt là DC4; DC5; DC6; DC7.
+ Chiết xuất Saponin tổng số: Cân 100 g mẫu I và II (50g ựối với mẫu
III), mẫu thảo mộc ựược chiết bằng dụng cụ chuyên dụng Shoxlet với dung môi MeOH 20% nước (8 giờ ựối với mẫu I và III, 12 giờ ựối với mẫu II) thu ựược dịch chiết MeOH tổng. Cô cạn bớt dung môi hòa thêm nước rồi chiết
lần lượt bằng n- Hexan, CHCl3, EtOAc, BuOH thu ựược các dịch n- Hexan,
CHCl3, EtOAc và dịch BuOH làm khan, sau ựó loại bỏ hết dung môi bằng cất quay chân không dưới áp xuất giảm, thu ựược các cặn tương ứng. Khối lượng cặn BuOH chắnh là khối lượng của Saponin tổng số. Các dịch chiết từ bã Trẩu, bã Sở, vỏ quả điều, bã Thanh hao hoa vàng ựược ký hiệu lần lượt là DC4; DC5; DC6; DC7.
+ Chiết xuất Alkaloid: Tiến hành cân 100g bã Trẩu (mẫu I), bã Sở (mẫu
II) và bã Thanh hao hoa vàng (mẫu IV) và 50g ựối với thịt quả điều (mẫu 3). Mẫu I, II và IV ựược ngâm trong 150ml HCl 1M (100ml ựối với mẫu III ) trong 2 ngàỵ Tiến hành 3 lần lặp rồi gộp các dịch chiết, cô bớt ựến còn 1/3 thể tắch, ựể yên qua ựêm. Sau ựó, lọc phần dịch bằng giấy lọc ựược các loại dịch chiết chứa Alkaloid tương ứng.