CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.2. Phân lập hợp chất tinh khiết
Thực hiện sắc ký cột chân không để tách phân đoạn các mẫu AL-SFE và FL-NK.
Điều kiện thực hiện:
- Cột thủy tinh kích thước 21 x 9 (cm).
- Chất hấp phụ: 500 g silica gel cỡ hạt 40 – 63 (àm).
- Mẫu phân tích: 50 g PĐ alcaloid AL-SFE hoặc PĐ flavonoid FL-NK.
Kết quả:
- Từ 50 g PĐ alcaloid AL-SFE, sau khi triển khai VLC và kiểm tra SKLM thu được 7 phân đoạn nhỏ, đánh số từ ALS1 ALS7.
- Từ 50 g PĐ flavonoid FL-NK, sau khi triển khai VLC và kiểm tra SKLM thu được 10 phân đoạn nhỏ, đánh số từ FL-1FL-10.
Bảng 3.4: Kết quả tách phân đoạn mẫu AL-SFE và FL-NK bằng VLC.
Phân đoạn Dung môi triển khai Khối lượng (g)
Các phân đoạn alcaloid (từ 50 g AL-SFE)
ALS1 n– hexan – ether ethylic (50 : 50) (0 : 100) 2,5 ALS2 ether ethylic – cloroform (50 : 50)(0 : 100) 2,8 ALS3 cloroform – ethyl acetat (95 : 5) 2,6 ALS4 cloroform – ethyl acetat (90 : 10) 6,6 ALS5 cloroform – methanol (90 : 10) 8,5 ALS6 cloroform – methanol (85 : 15) 9,1 ALS7 cloroform – methanol (85 : 15) 12,2 Các phân đoạn flavonoid (từ 50 g FL-NK)
FL-6 cloroform – ethyl acetat (90 : 10) 5,3 FL-7 cloroform – ethyl acetat (85 : 15) 3,9 FL-8 cloroform – ethyl acetat (80 : 20) 5,9 FL-9 cloroform – ethyl acetat (80 : 20) 9,9 FL-10 cloroform – ethyl acetat (75 : 25) 8,6
* Ghi chú: các PĐ từ FL-1 đến FL-5 không có thành phần flavonoid khi thử nghiệm với TT FeCl3 1% nên không được trình bày.
3.2.2. Sắc ký cột cổ điển phân lập các hợp chất tinh khiết
- 18 hợp chất tinh khiết đã được phân lập từ các phân đoạn alcaloid và flavonoid TNHC, gồm: 13 alcaloid, 3 flavonoid, 1 coumarin, 1 acid hữu cơ. Các hợp chất này được gọi tên theo thứ tự từ (1) đến (18).
Các dữ liệu phổ nghiệm cho nhận định (18) cũng chính là (1).
Cấu trúc các hợp chất này được xác định bằng các phương pháp phổ (Bảng 3.5).
Bảng 3.5: Các hợp chất tinh khiết phân lập được từ các cao TNHC.
PĐ ban đầu
PĐ sau khi VLC
Hợp chất tinh khiết đã phân lập
Khối lượng (≈ mg) Tên gọi Tên được xác định bằng
các phương pháp phổ
AL-SFE
ALS1
(1) hippadin 200
(2) 6-ethoxyundulatin
(Chất mới) 20
(3) 6-ethoxybuphanidrin* 30
(4) augustamin 150
ALS2 (5) undulatin 200
ALS3 (6) 6-hydroxyundulatin 300
(7) 6-hydroxybuphanidrin 200
AL-NK Hỗn hợp kết tủa từ cao AL-NK
(8) crinamidin 980
(9) 6-hydroxycrinamidin 700
(10) 6-hydroxypowellin* 300
AR-96 Kết tủa từ AR-96 (11) lycorin 1200
FL-NK
FL-6
(12) kaempferol 20
(13) esculetin* 580
(14) p-hydroxybenzoic 30
FL-7 (15) flazin* 20
FL-8 (16) astragalin 600
FL-10 (17) isoquercitrin* 800
FR-96 FR-1 (18) hippadin 300
Hình 3.3: SKĐ các hợp chất phân lập từ các PĐ alcaloid.
Hình 3.4: SKĐ các hợp chất phân lập từ PĐ alcaloid AR-96 và PĐ flavonoid.
3.2.2.1. Phân lập alcaloid tinh khiết từ PĐ alcaloid AL-SFE
a. Phân lập (1) và (4) từ phân đoạn ALS1: sau khi phân lập PĐ ALS1 qua cột sắc ký silica gel thu được 4 phân đoạn nhỏ như Bảng 3.6.
Bảng 3.6: Kết quả phân lập alcaloid từ phân đoạn ALS1.
Phân đoạn Dung môi triển khai Chất phân lập Khối lượng ALS1-1 n–hexan – cloroform (80 : 20) (1) ≈ 200 mg ALS1-2,3 n–hexan – cloroform (65 : 35) 2 và 3 ≈ 30 mg
ALS1-4 n–hexan – cloroform (60 : 40) (4) ≈ 150 mg - Từ PĐ ALS1-1 và ALS1-4 thu được (1) (≈ 200 mg) và (4) (≈ 150 mg).
- Phân đoạn ALS1-2,3 khi kiểm tra trên SKLM cho thấy thành phần gồm 2 vết chính.
Tiếp tục thực hiện một số kỹ thuật cột sắc ký silica gel lần thứ hai và SKLM chế hóa
đều không hiệu quả với việc tách hai vết này. Tiếp tục khảo sát để tách hai vết 2 và 3 từ PĐ alcaloid AL-SFE như sau:
b. Phân lập các (2) và (3) từ PĐ alcaloid AL-SFE:
- 50 g PĐ alcaloid AL-SFE được chiết siêu âm với dung môi ether ethylic lạnh trong 30 phút, gạn lấy lớp dịch chiết. Thực hiện lặp lại cho đến khi PĐ ban đầu không còn vết (2) và (3) (kiểm tra bằng KLM). Gộp dịch chiết, thu hồi dung môi được 10 g cắn.
Cắn PĐ ether ethylic được phân lập trên cột sắc ký silica gel RP-18, rửa giải dung môi với hệ nước – acid acetic (45 : 1), lần lượt thu được 4 phân đoạn nhỏ (Bảng 3.7).
Bảng 3.7: Kết quả triển khai sắc ký cột với chất hấp phụ pha đảo.
- Các PĐ ether 2 và PĐ ether 3 có ít tạp nên được gộp lại và kiềm hóa bằng dung dịch amoniac 25% đến pH 9. Lắc với n–hexan. Gộp các dịch n–hexan, thu hồi dung môi, thu được 180 mg PĐ n–hexan.
Cắn PĐ n–hexan tiếp tục được phõn lập trờn cột sắc ký silica gel, cỡ hạt 15 - 40 (àm), lần lượt thu được 4 phân đoạn có thành phần như trình bày ở Bảng 3.8.
Bảng 3.8: Kết quả phân lập (2) và (3) từ PĐ n–hexan.
Phân đoạn Dung môi triển khai Chất phân lập Khối lượng
PĐ n–hexan 1 n–hexan - Không đáng kể
PĐ n–hexan 2 n–hexan – cloroform
(83 : 17) (2) ≈ 20 mg
PĐ n–hexan 3 n–hexan – cloroform
(78 : 22) (3) ≈ 30 mg
- Từ PĐ n–hexan 2 và PĐ n–hexan 3 thu được (2) (≈ 20 mg) và (3) (≈ 30 mg).
Như vậy, việc phân lập PĐ ALS1 trên cột sắc ký silica gel thu được (1) và (4). Việc Phân đoạn Dung môi Cụm vết alcaloid
PĐ ether 1
nước – acid acetic (45 : 1)
Cụm vết phân cực hơn hợp chất 3 PĐ ether 2 Hợp chất 2 + 3 + ít tạp phân cực PĐ ether 3 Hợp chất 2 + 3 + ít tạp kém phân cực PĐ ether 4 Hợp chất 2 + 3 + nhiều tạp kém phân cực
Sơ đồ 3.4 Sơ đồ phân lập hợp chất (2) và (3) từ PĐ alcaloid AL-SFE.
c. Phân lập (5) từ phân đoạn ALS2:
Cắn ALS2 được phân lập trên cột sắc ký silica gel, thu được (5) (≈ 200 mg).
d. Phân lập các (6) và (7) từ phân đoạn ALS3:
Cắn ALS3 được phân lập trên cột sắc ký silica gel, thu được lần lượt (6) (≈ 300 mg) và (7) (≈ 200 mg).
3.2.2.2. Phân lập các hợp chất tinh khiết từ cao AL-NK
- Sau khi thu hồi dung môi, PĐ alcaloid AL-NK xuất hiện cắn có màu trắng ngà. Tách lấy phần cắn này và rửa vài lần bằng dung môi aceton lạnh. Phần cắn sau khi rửa được sấy dưới áp suất giảm đến khi kết dung môi, thu được sản phẩm có 4 vết dương tính với TT Dragendorff khi kiểm tra trên SKLM.
- Tiếp tục phân lập phần cắn này trên sắc ký cột silica gel, kết quả ở Bảng 3.9.
Khối lượng của PĐ ALNK-1ALNK-3 không đáng kể nên không khảo sát tiếp.
Từ PĐ ALNK-4, ALNK-5, ALNK-6 thu được lần lượt các hợp chất (8) (≈ 980 mg);
(9) (700 mg) và (10) (≈ 300 mg).
Bảng 3.9: Kết quả phân lập các (8), (9), (10) từ PĐ alcaloid AL-NK.
Phân đoạn Dung môi triển khai Chất phân lập Khối lượng (mg) ALNK-4 cloroform – ethyl acetat
(100 : 0)(90 : 10) (8) 980
ALNK-5 cloroform – ethyl acetat
(85 : 15) (9) 700
ALNK-5’ cloroform – ethyl acetat
(80 : 20) - 2000
ALNK-6 cloroform – ethyl acetat
(80 : 20) (10) 300
- Việc phân lập hợp chất tinh khiết còn lại của PĐ AL-NK vẫn đang được thực hiện.
3.2.2.3. Phân lập chất tinh khiết từ PĐ alcaloid AR-96 từ rễ TNHC
- PĐ alcaloid AR-96 có nhiều cắn màu trắng, khối lượng khoảng 12,6 g. Lọc lấy phần cắn, kết tinh lại trong dung môi cloroform. Tách phần tinh thể sau khi kết tinh, rửa vài lần bằng dung môi aceton lạnh, thu được (11) (≈ 1200 mg).
- Phần hoạt chất còn lại của PĐ alcaloid AR-96 vẫn đang được nghiên cứu.
3.2.2.4. Phân lập các hợp chất tinh khiết từ PĐ flavonoid FL-NK
Các thử nghiệm cho nhận định PĐ FL1FL5 có thành phần chủ yếu là các hợp chất màu và phytosterol nên không khảo sát tiếp.
a. Phân lập các (12), (13) và (14) từ phân đoạn FL-6:
- Phân đoạn FL-6 có 4 vết trên SKLM, khi dung môi bão hòa thì xuất hiện cắn màu vàng. Tách phần cắn này và kết tinh lại trong ethyl acetat, thu được (13) (≈ 20 mg).
- Phần cao màu vàng còn lại sau khi tách (13) được tiếp tục phân lập trên sắc ký cột silica gel, thu được (12) (≈ 560 mg) và (14) (≈ 30 mg).
b. Phân lập (15) từ phân đoạn FL-7:
- Cắn của PĐ FL-7 được kết tinh lại trong ether ethylic, thu được (15) (≈ 20 mg).
c. Phân lập (16) và (17) từ phân đoạn FL-8 và FL-10:
- Phân lập FL-8 và FL-10 trên sắc ký cột silica gel, thu được lần lượt (16) (≈ 560 mg)
3.2.2.5. Phân lập hợp chất flavonoid tinh khiết từ cao FR-96
- Sau khi tách phân đoạn cao FR-96 bằng VLC thì thu được 8 phân đoạn FR1 FR8.
- Từ PĐ FR1 thu được hợp chất (18) (≈ 300 mg). Kiểm tra trên SKLM, phát hiện bằng các thuốc thử đặc trưng đều đưa đến nhận định (18) cũng chính là (1) đã được phân lập từ PĐ alcaloid AL-SFE của lá. (18) kết tinh trong n–hexan dạng tinh thể hình kim, không màu và dương tính với TT Dragendorff.
Các phân đoạn còn lại từ FR2 FR8 có thành phần tương tự PĐ flavonoid FL-NK nên không trình bày thêm.
3.2.3. Xác định cấu trúc
Cấu trúc các hợp chất được xác định bằng các dữ liệu phổ UV, IR, MS và NMR. So sánh dữ liệu thu được với dữ liệu từ các tài liệu khoa học, nếu trùng khớp thì kết luận cấu trúc theo tài liệu, nếu là chất mới thì biện giải để xác định cấu trúc.
3.2.3.1. Xác định cấu trúc hợp chất (2)
Hợp chất (2): kết tinh trong cloroform, không màu; tan trong n-hexan và cloroform.
Dương tính với TT Dragendorff nên định hướng đây là một alcaloid.
- Phổ UV/methanol: có hai cực đại hấp thu λmax 213 và 279 (nm).
- Phổ IR/KBr: các dao động tại 1476 (epoxy); 1216 (O-CH3); 1073 (O-CH2-O); 1620;
1476 (C=C nhân thơm) (cm-1).
- Phổ 1H và 13C-NMR (CDCl3, 500 MHz, TMS) của (2) có độ chuyển dịch hóa học của proton và carbon đặc trưng của alcaloid có khung crinin.
Phổ DEPT và phổ 13C-NMR: cho nhận định cấu trúc hợp chất (2) như sau:
- Có ít nhất 20 tín hiệu carbon, trong đó có 5 tín hiệu carbon >C=, 1 carbon
>C<, 5 carbon >CH-, 1 carbon =CH-, 1 carbon -O-CH2-O-, 4 carbon -CH2-, 2 carbon -CH3 và 1 carbon -CH3.
- 5 tín hiệu carbon >C= vùng trường thấp tại δC 149,4; 143,2; 139,7; 135,0;
119,7 (ppm) là các vị trí C-9, C-7, C-10a, C-8 và C-6a tương ứng của vòng thơm. Phổ HSQC không có tín hiệu của C7; HMBC cho thấy C-7 có tương tác với nhóm -OCH3
(C15 với δC 59,7 ppm) nên khẳng định C-7 có nhóm thế -OCH3, điều này cũng phù
hợp với các tài liệu [57], [58], [61], [116]: nhóm thế tại C-7 thông thường là nhóm - OCH3. Tín hiệu >C< trong vùng trường cao δC 41,7 ppm được gán cho carbon C-10b.
- 5 tín hiệu carbon methin >CH- đều ở vùng trường thấp nên có thể nhận định đây là các carbon có gắn với dị tố. Tín hiệu tại δC 91,8 ppm được gán cho C-6 và có khả năng tại đây có nhóm -OR rút điện tử như trường hợp 6-ethoxybuphanidrin [38];
thêm vào đó, nếu C-6 không có nhóm thế thì độ chuyển dịch của carbon δC ≤ 60 ppm (trường hợp undulatin, crinamidin); không có tín hiệu carbon methylen trên phổ DEPT; và phổ HSQC cho 1 tín hiệu C-6 với proton δH 4,68 ppm. Carbon δC 74,7 ppm được gán cho C-3 do có tín hiệu của -OCH3 (C-14 với δC 57,0 ppm) tương tác trên phổ HMBC. Ba tín hiệu còn lại δC 55,2; 54,8 và 53,7 ppm cho nhận định cấu trúc hợp chất (2) có vòng 1,2-β-epoxy tại C-1 (δC 53,7 ppm) và C-1 (δC 55,2 ppm) như trường hợp của 6α-hydroxyundulatin và 6α-hydroxycrinamidin (C-1 δC ≈ 53 và C-2 δC ≈ 56 ppm) [92]; trong khi buphanidrin hay powellin, độ chuyển dịch của các carbon =CH- (C-1 δC ≈ 132 và C-2 δC ≈ 125 ppm).
- 1 tín hiệu =CH- tại δC 96,7 ppm trên phổ DEPT và kết hợp với phổ HSQC có cho nhận định đây là carbon C-10của nhân thơm.
- Trong số các carbon methylen -CH2-, tín hiệu tại δC 100,9 ppm đặc trưng cho carbon methylendioxy -O-CH2-O-; ba tín hiệu methylen -CH2- tại δC 46,4; 36,0; 25,0 ppm là vị trí tương ứng của các carbon C-11, C-12 và C-4. Một tín hiệu -CH2- tại 63,7 ppm (C-16) là carbon có gắn dị tố, giả thuyết này kết hợp với carbon -CH3 tại δC 15,6 ppm (C-17) cho nhận định -OR tại C-6 là nhóm thế -O-CH2-CH3.
Phổ 1H-NMR:
- Tương tác trên HSQC và HMBC của proton δH 6,62 ppm (1H, s) với các carbon C-6a, C-7, C-8, C-9, C-10b khẳng định đây là H-10.
- Phổ HSQC cho tín hiệu C6 với proton δH 4,68 ppm (1H, s) và trên HMBC proton này cho tương tác với các carbon C-12, C-14, C-6a, C-8, C-10a, C-7, C-4a.
Như vậy, proton δH 4,68 ppm là H-6.
- Proton tại δH 5,91 ppm ghép với proton δH 5,91 ppm cho đỉnh đôi (d) với hằng số ghép J = 1,5 Hz; kết hợp phổ HSQC khẳng định hai tín hiệu proton này là của carbon C-13 (-O-CH2-O-).
- Tương tác trên phổ HMBC và HSQC cho khẳng định, tín hiệu tại δH 3,40 ppm (3H, s) rất mạnh là proton của nhóm thế -OCH3 trên C-3.
- Dữ liệu trên phổ HMBC và HSQC cho phép nhận định chùm tín hiệu bị chồng ghép với tích phân 5 proton tại δH 3,96 đến 3,98 ppm như sau: 3 proton tương tác mạnh tại δH 3,98 ppm của nhóm thế -OCH3 trên C-7; 2 proton còn lại bị chồng ghép có δH 3,96 m tương ứng với 1 proton của H-3 và 1 proton của H-16.
- Hai tín hiệu proton tại δH 3,73 (1H, d, J = 3 Hz), δH 3,32 (1H, m) và tương tác trên phổ COSY cho kết luận đây là H-1 và H-2. Tương tác trên phổ COSY cũng khẳng định thêm proton δH 3,96 m là H-3 và proton δH 3,40 ppm (3H, s) là 3 proton của C-14 (-OCH3).
- Tương tác trên phổ HSQC cho kết luận δH 3,70 ppm (1H, m) là proton còn lại của H-16; tương tác trên phổ HMBC cho tín hiệu proton này tương tác với C-6 và C-15; proton δH 3,96 ppm (m) tướng tác với C-6, C-7 và C-15. Như vậy có thể khẳng định chắc chắn δH 3,70 và 3,96 ppm là 2 proton của H-16.
- Các tín hiệu proton của carbon -CH2- trên phổ HSQC và tương tác trên phổ COSY cho nhận định: cặp tín hiệu ghép đỉnh đa (m) tại δH 2,33 và 1,73 ppm là 2 proton của H-11; tương tự cặp tín hiệu tại δH 3,12 và 2,60 ppm là 2 proton của H-12;
cặp tín hiệu proton trong vùng trường cao δH 1,64 ppm (br d, J = 14 Hz) và δH 1,37 ppm (dt, J = 13,5; 3,5 Hz) là 2 proton của H-4.
- Proton tại δH 3,52 ppm (1H, dd, J = 13,5; 3,5) được các định là proton H-4a.
Proton này ghép với 2 proton của H-4 (H4 axial và H4 equatorial) cho đỉnh dd với hằng số ghép lớn (Jaa = 13,5) đưa đến nhận định vị trí proton này là H-4a vị trí axial.
Phổ COSY cũng cho tín hiệu H-4a δH 3,52 ppm tương tác với H-4 δH 1,37 ppm.
- Quan sát phổ giãn HSQC (15 – 45 ppm) cho tín hiệu C-17 gắn với proton δH
1,25 ppm; phổ HMBC có tương tác của nhóm -CH3 gắn với C-16, như vậy carbon C-
17 là nhóm -CH3. Tín hiệu trên phổ COSY có tương tác của proton δH 1,25 ppm với hai tín hiệu proton của H-16 cũng khẳng định thêm C-6 có nhóm thế -O-CH2-CH3. - Phổ ESI-MS (+) xuất hiện pic ion m/z = 376,1768 [M + H]+ (theo dự đoán là 376,1755), kết hợp với phổ 13C-NMR và DEPT khẳng định hợp chất (2) có phân tử lượng phù hợp với công thức nguyên C20H25NO6, M = 375, độ bất bão hòa là 9.
Nhận xét:
- Các dữ liệu trên phổ NMR cho nhận định (2) là alcaloid có cấu trúc khung crinin loại (1,2-β-epoxy-5,10b-enthanophenanthridin) [56], [57], [92].
- Độ chuyển dịch của các carbon và proton trên phổ NMR của hợp chất (2) phù hợp với cấu trúc của hợp chất undulatin [129], 6α-undulatin [92]. Tuy nhiên, trên phổ 13C có 2 điểm khác biệt tại vị trí C-6 của (2) có δC 91,8 ppm > δC 85,2 ppm (C-6 của 6α- hydroxyundulatin) và thêm hai tín hiệu carbon của C-16 và C-17 [92].
Phân tích tất cả các dữ liệu phổ học của (2) có thể khẳng định cấu trúc của hợp chất này theo khung crinin là 1,2-epoxy-6-ethoxy-3,7-dimethoxycrinin hoặc theo nhóm hợp chất undulatin thì đây là hợp chất 6-ethoxyundulatin.
Kết luận: cấu trúc hợp chất (2) thuộc khung crinin với tên gọi là 6-ethoxyundulatin, một alcaloid lần đầu tiên được phân lập từ dược liệu.
Cấu trúc này được xác định là chất mới khi tra cứu trên SciFinder ngày 6/9/2013.
- Phổ MS và NMR của hợp chất (2) được trình bày ở Phụ lục 1.
Bảng 3.10: Dữ liệu phổ NMR (Máy 500 MHz, CDCl3) của hợp chất (2).
Hợp chất (2) 6α-hydroxyundulatin [92]
C DEPT δC
ppm
δH
ppm, m
J (Hz)
δC ppm
δH
ppm, m
J (Hz)
1 >CH-O- 53.7 3.73 d 3.0 53.8 3.73 d 3.4
2 >CH-O- 55.2 3.32 m 55.0 3.32 ddd 3.4; 2.5; 1.0
3 >CH-O- 74.7 3.96 m 74.4 3.96 dd 3.0; 2.5
4 >CH2 25.0 1.37 dt
13.5; 3.0 24.3 1.35 ddd 14.0 ;13.5; 3.0
1.64 br d 1.84 m -
4a >CH- 54.8 3.52 dd 13.5; 3.5 54.6 3.65 dd 13.5; 3.5
6 >CH-O- 91.8 4.68 s 85.2 5.21 s -
6a =C< 119.7 - - 119.2 - -
7 =C-O- 143.2 - - 142.8 - -
8 =C-O- 135.0 - - 134.3 - -
9 =C-O- 149.4 - - 149.4 - -
10 =CH- 96.7 6.62 s - 96.7 6.61 s -
10a =C< 140.0 - - 138.8 - -
10b >C< 41.7 - - 42.0 - -
11 >CH2 36.0 1.73 m -
35.3 1.78 ddd 12.0; 9.5; 4.5
2.33 m - 2.39 ddd 12.0; 10.5; 6.0
12 >CH2 46.4 2.60 m -
46.1 2.75 ddd 13.5; 9.5; 6.0
3.12 m - 3.17 ddd 13.5; 10.5; 4.5
13 -O-CH2-O- 100.9 5.87 d 1.5
100.9 5.88 d 1.5
5.91 d 1.5 5.90 d 1.5
14 3-OCH3 57.0 3.40 s 57.2 3.39 s
15 7-OCH3 59.7 3.98 s - 59.7 4.03 s
16 6-O-CH2-CH3 63.7 3.70 m -
- - -
3.96 m - - -
17 6-O-CH2-CH3 15.6 1.25 over - - - -
Bảng 3.11: Các tương tác proton trên phổ COSY, HMBC của hợp chất (2).
H δH
ppm, m
J Hz
HMBC COSY
1 3.73 d 3.0 C-10a; C-10b; C-6; C-4a H-2
2 3.32 m C-4 H-1; H-3
3 3.96 m C-1; C-2; C-14 H-2; H-14; H-4α
4β 1.37 dt
13.5; 3.0 C-17; C-4a H-4α; H-4a
4α 1.64 br d C-4; C-10b; C-3; C-10a H-4β; H-3
4a 3.52 dd 13.5; 3.5 C-12; C-11 H-4β; H-4α
6 4.68 s C-6a; C-8; C-10a; C-7; C-16 -
- - - - -
- - - - -
- - - - -
- - - - -
10 6.62 s - C-6a; C-7; C-8; C-9 -
- - - - -
- - - - -
11 1.73 m - C-1; C-4; C-10b; C-10a H-11*; H-12*; H-12 11* 2.33 m - C-4a; C-12; C-10a; C-10b H-11; H-12; H-12*
12 2.60 m - C-11; C-4a; C-6 H-12*; H-11; H-11*
12* 3.12 m - C-6; C-4a H-12; H-11; H-11*
13 5.87 d 1.5
C-8, C-9
5.91 d 1.5
14 3.40 s C-3 H-3
15 3.98 s - C-7 H-6
16 3.70 m -
C-6; C-17 H-17
3.96 m -
17 1.25 over - C-16 H-16
Ghi chú: H-11: H-11 endo H-12: H-12 endo
Hình 3.5: Cấu trúc hóa học và dữ liệu phổ NMR (500 MHz, CDCl3) hợp chất (2).
Hình 3.6: Cấu trúc hóa học của hợp chất (2) (6-ethoxyundulatin).
3.2.3.2. Cấu trúc các hợp chất chưa được công bố từ cây TNHC Hợp chất (3): kết tinh trong n–hexan dạng tinh thể hình kim, không màu.
- UV/methanol: max (nm) 214 và 282.
- IR (KBr): υmax (cm-1) 1469 (C=C); 1086 (-OCH2O-).
- ESI-MS (+): m/z = 360,48 [M+H]+; M phù hợp với công thức nguyên C20H25NO5. - 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δH (ppm) 1,25 (3H; overlapped; H-17); 1,59 (1H; dt; J
= 4,5; 13,5 Hz; H-4β); 1,87 (2H; m; H-11); 1,98 (1H; m; H-4α); 2,69 (1H; m; H-12α); 3,28 (1H; m; H-12β); 3,33 (3H; s; 3-OMe); 3,73 (1H; m; H-16); 3,76 (1H; m; H-4a); 3,84 (1H;
m; H-3); 3,97 (3H; s; 7-OMe); 4,02 (1H; m; H-16*); 4,77 (1H; s; H-6); 5,85-5,89 (2H; 2d; J
= 1,5 Hz; C-13); 5,95 (1H; m; H-2); 6,54 (1H; s; H-1); 6,56 (1H; s; H-10).
13C-NMR (125 MHz, CDCl3): δC (ppm) 15,6 (C-17); 28,8 (C-4); 41,3 (C-11); 44,2 (C-10b); 47,6 (C-12); 56,0 (C-14); 56,4 (C-4a); 59,7 (C-15); 64,0 (C-16); 72,4 (C-3);
91,9 (C-6); 97,1 (C-10); 100,8 (C-13); 119,3 (C-6a); 125,6 (C-2); 132,5 (C-1); 134,9 (C-8); 140,0 (C-10a); 143,0 (C-7); 149,3 (C-9).
So sánh dữ liệu phổ học của (3) với dữ liệu tương ứng trong tài liệu [38], có thể kết luận: (3) là alcaloid 6-ethoxybuphanidrin.
Hợp chất (10): kết tinh trong methanol dạng hình kim, không màu.
- UV/methanol: max (nm) 286.
- IR (KBr): υmax (cm-1) 3508 (OH); 1616 (C=C); 1288 (-OCH3); 1037 (-OCH2O-).
- HR-ESI-MS (+): m/z = 318,1369 [M+H]+;M phù hợp với công thức C17H19NO5. - 1H-NMR (500 MHz, MeOD): δH (ppm) 1,78 (1H; dt; J = 4,0; 13,0; H-4β); 1,87 (1H; m;
H-4α); 1,91 (2H; m; H-11); 2,77 (1H; m; H-12); 3,28 (1H; m; H-12*); 3,80 (1H; dd; J = 13,0; 4,5 Hz; H-4a); 4,04 (3H; s; H-14); 4,30 (1H; m; H-3); 5,16 (1H; s; H-6); 5,92 (2H; m;
H-13); 5,94 (1H; m; H-2); 6,62 (1H; d; J = 10,5 Hz; H-1); 6,70 (1H; s; H-10).
- 13C-NMR (125 MHz, MeOD): δC (ppm) 33,3 (C-11); 41,8 (C-4); 45,5 (C-10b); 48,5 (C-12); 57,3 (C-4a); 60,1 (C-14); 64,5 (C-3); 86,1 (C-6); 97,9 (C-10); 102,3 (13);
120,5 (C-6a); 128,9 (C-2); 132,0 (C-1); 135,7 (C-8); 141,2 (C-10a); 142,2 (C-7);
151,2 (C-9).
Dữ liệu phổ học của hợp chất (10) cho kết luận đây là alcaloid 6-hydroxypowellin.
Hợp chất (12): kết tinh trong aceton, dạng tinh thể vô định hình, màu vàng.
- UV/methanol: max (nm) 265 và 365.
- IR (KBr): υmax (cm-1) 3250 (OH); 1650 (C=O); 1089 (C-O).
- ESI-MS (+): m/z = 308,89 [M+Na]+; M phù hợp với công thức nguyên C15H10O6. - 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δH (ppm) 6,19 (1H; d; J = 2 Hz, H-6); 6,43 (1H; d; J
= 2 Hz, H-8); 6,92 (2H; d; J = 9 Hz, H-3’, H-5’); 8,04 (2H; d; J = 9 Hz, H-2’, H-6’); 9,32 (1H, s, H-4’-OH); 10,11 (1H, s, 3-OH); 10,78 (1H, s, H-7); 12,48 (1H, s, 5-OH).
- 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6): δC (ppm) 93,5 (C-8); 98,2 (C-6); 103,0 (C-10);
115,4 (C-3’,5’); 121,7 (C-1’); 129,5 (C-2’,6’); 135,6 (C-3); 146,8 (C-2); 156,2 (C-5);
159,2 (C-4’); 160,7 (C-9); 163,9 (C-7); 175,9 (C-4).
So sánh dữ liệu phổ học của (12) với dữ liệu tương ứng trong các tài liệu [81], [88], có thể kết luận: hợp chất (12) là flavonoid kaempferol.
Hợp chất 13: kết tinh trong aceton, tinh thể màu vàng.
- UV/ethylacetat: max (nm) 296 và 342.
- IR (KBr): υmax (cm-1) 3190 (OH); 1660 (C=O); 1608 (C=C).
- ESI-MS (-): m/z = 177,24 [M-H]+; M phù hợp với công thức nguyên C9H6O4. - 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δH (ppm) 6,15 (1H; d; J = 9,5 Hz; H-3); 6,74 (1H;
s; H-8); 6,97 (1H; s; H-5); 7,84(1H; d; J = 9,5 Hz; H-4).
- 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6): δC (ppm) 102,7 (C-8); 110,8 (C-10); 111,5 (C-3);
112,4 (C-5); 142,9 (C-6); 144,4 (C-4); 148,5 (C-9); 150,4 (C-7); 160,9 (C-2).
So sánh dữ liệu phổ học của (13) với dữ liệu tương ứng trong tài liệu [114], có thể kết luận: hợp chất (13) là coumarin esculetin.
Hợp chất 14: kết tinh n–hexan - cloroform (20:80), dạng hình kim, không màu.
- UV/ethyl acetat: max (nm) 253.
- IR (KBr): υmax (cm-1) 3390 (-OH); 1674 (C=O); 1608 (C=C).
- ESI-MS (-): m/z = 137,10 [M-H]+, M phù hợp với công thức nguyên C7H6O3.
- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δH (ppm) 6,81(2H; dd; J = 2,5; 9,5 Hz; H-3 và H- 5); 7,78 (2H; dd; J = 2,5; 9,5 Hz; H-2, H-6).
- 13C-NMR (125 MHz, DMSO- d6): δC (ppm) 115,1 (C-3, C-5); 121,4 (C-1); 131,5 (C-2, C-6); 161,6 (C-4); 167,1 (C-7).
So sánh dữ liệu phổ học của (14) với dữ liệu tương ứng trong tài liệu [127], có thể kết luận: hợp chất (14) là acid hữu cơ p-hydroxybenzoic.
Hợp chất 15: kết tinh trong ether etylic, tinh thể màu vàng.
- ESI-MS (+): m/z 309,11 [M+H]+; M phù hợp với công thức nguyên C17H12N2O4. -1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δH (ppm) 4,69 (2H; d; J = 3,5 Hz; H-6’); 5,49 (1H;
s; 6’-OH); 6,63 (1H; d; J = 3,5 Hz; H-3’); 7,35 (1H; td; J = 7,5; 1 Hz; H-6); 7,42 (1H;
d; J = 3,5 Hz; H-4’); 7,65 (1H; td; J = 7,5; 1 Hz; H-7); 7,82 (1H; d; J = 8 Hz; H-8);
8,42 (1H; d; J = 8 Hz; H-5); 8,84 (1H; s; H-4); 11,59 (1H; s; -NH).
13C-NMR (125 MHz, DMSO): δC (ppm) 55,9 (C-6’); 109,1 (C-3’); 111,0 (C-4’);
112,8 (C-8); 115,6 (C-4); 120,5 (C-6); 120,9 (C-4b); 122,0 (C-5); 128,9 (C-7); 129,8 (C-4a); 131,9 (C-9a); 132,4 (C-1); 137,1 (C-3); 141,4 (C-8a); 151,2 (C-5’); 157,3 (C- 2’); 166,4 (C-10).
So sánh dữ liệu phổ học của (15) với dữ liệu tương ứng trong tài liệu [105],có thể kết luận: hợp chất (15) là alcaloid flazin.
Hợp chất 17: kết tinh trong ethyl acetat, dạng bột vô định hình, màu vàng sậm.
- UV/methanol: max (nm) 255 và 354.
- IR (KBr): υmax (cm-1) 3219 (OH); 1662 (C=O); 1060 (C-O).
- ESI-MS (+): m/z = 487,33 [M+Na]+, M phù hợp với công thức nguyên C21H20O12. - 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δH (ppm) 3,08 (2H; overlapped; H-3” và H- 4”);
3,24 (1H; overlapped; H-5”); 3,24 (1H; overlapped; H-2”); 3,32 (1H; overlapped, H- 6”); 3,58 (1H; d; J = 11,5 Hz, H-6”); 5,46 (1H; d; J = 7,5 Hz, H-1”); 6,20 (1H; d; J = 2 Hz, H-6); 6,40 (1H; d; J = 2 Hz, H-8); 6,84 (1H; d; J = 9 Hz; H-5’); 7,57 (1H;
overlapped, H-6’); 7,58 (H; overlapped, H-2’);12,62 (1H; s; 5-OH).