CHƯƠNG 2. THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ
2.5. Kết quả thử hoạt tính của các hợp chất phân lập đƣợc
2.5.1. Kết quả thử hoạt tính kháng viêm của các hợp chất phân lập từ loài Rhabdastrella providentiae
Ho t tính kháng viêm của các hợp chất phân lập được t loài hải miên Rhabdastrella providentiae (RP1-RP18) được đ nh gi thông qua khả năng ức chế sự sinh sản NO trong tế bào BV2 được kích thích bởi LPS được thực hiện như mục 2.2.3.2. Trước khi thử khả năng ức chế sản sinh NO trên tế bào BV2, các hợp chất RP1-RP18 được đ nh gi ảnh hưởng đến sự phát triển của tế bào BV2 ở các nồng đ thử nghiệm (20, 40 và 80 àM). Kết quả cho thấy cỏc hợp chất này khụng ảnh hưởng đến sự phát triển bình thường của tế bào BV2 (phần trăm tế bào sống sót nằm trong giới h n 90%-110% so với mẫu chuẩn không chứa chất thử nghiệm). Do đ lượng NO sản sinh trong môi trường nuôi cấy được coi như không b ảnh hưởng bởi sự phát triển quá mức hay sự chết đi của tế bào trong đi u kiện thí nghiệm có mặt các hợp chất RP1-RP18.
Bảng 2.1. Kết quả đánh giá hoạt tính ức chế sự sản sinh ra NO trong tế bào BV2 của hợp chất RP1-RP18
Hợp chất IC50 (àM)
RP2 7,4 ± 0,4
RP5 75,3 ± 3,8
RP7 17,5 ± 0,9
RP8 46,8 ± 2,3
RP9 22,9 ±1,1
RP10 39,2 ± 2,0
RP11 26,3 ± 1,3
RP12 19,4 ± 1,0
RP13 29,4 ± 1,5
RP14 17,1 ± 0,9
RP15 19,5 ± 1,0
RP16 43,8 ± 2,2
ĐC 4,5 ± 0,5
*ĐC Butein được sử dụng là chất đối chứng dương.
Sau khi đ nh gi sơ b tác dụng ức chế sự sản sinh ra NO trong tế bào BV2 được kớch thớch bởi LPS của 18 hợp chất (RP1-RP18) ở nồng đ 80 àM, cỏc hợp chất RP2, RP5, RP7-RP16 có khả năng ức chế >50% sự sản sinh ra NO trong tế bào BV2.
Do đ c c chất này được tiếp tục thí nghiệm ở các nồng đ kh c nhau để x c đ nh giá tr IC50. Kết quả được thể hiện ở Bảng 2.1.
2.5.2. Kết quả thử hoạt tính kháng viêm của các hợp chất phân lập từ loài Xestospongia muta
Ho t tính kháng viêm của các hợp chất phân lập được t loài hải miên Xestospongia muta được đ nh gi thông qua khả năng ức chế sự sinh sản NO trong tế bào BV2 được kích thích bởi LPS được thực hiện như mục 2.2.3.2.
Trước khi thử khả năng ức chế sản sinh NO trên tế bào BV2, các hợp chất XM1-XM11 được đ nh gi ảnh hưởng đến sự phát triển của tế bào BV2 ở các nồng đ thử nghiệm (20, 40 và 80 àM). Kết quả cho thấy cỏc hợp chất XM2-XM5, XM7 gõy chết tế bào (>30%) ở nồng đ 40 và 80 àM. Tuy vậy, cỏc hợp chất này khụng ảnh hưởng đến sự phỏt triển bỡnh thường của tế bào BV2 ở nồng đ < 20 àM. Cũn cỏc hợp chất XM9-XM11 ức chế <50% sự sản sinh ra NO trong tế bào BV2 ở nồng đ thử nghiệm cao nhất 80 àM. Vỡ thế, cỏc hợp chất này khụng được tiếp tục thớ nghiệm để x c đ nh IC50. Ba hợp chất còn l i XM1, XM6, XM8 tiếp tục được thí nghiệm ở các nồng đ kh c nhau để x c đ nh giá tr IC50. Kết quả đ nh gi được thể hiện ở bảng dưới:
Bảng 2.2. Kết quả đánh giá hoạt tính ức chế sự sản sinh ra NO trong tế bào BV2 của các hợp chất XM1-XM11
Hợp chất IC50 (àM)
XM1 4,9±0,24
XM6 11,5± 0,57
XM8 8,2 ± 0,41
ĐC 4,4 ± 0,5
*ĐC Butein được sử dụng là chất đối chứng dương.
2.5.3. Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư của các hợp chất phân lập từ loài Rhabdastrella providentiae
Phép thử ho t tính g y đ c tế bào được thực hiện theo phương ph p được mô tả trong mục 2.2.3.1. Các hợp chất RP1-RP18 phân lập được t loài hải miên R.
providentiae được thử ho t tính g y đ c tế bào in vitro trên 5 dòng tế bào ung thư ở
người: ung thư gan (Hep-G2) ung thư ph i (LU-1), ung thư vú (MCF-7), ung thư máu (HL-60), ung thư da (SK-Mel-2). Kết quả thử ho t tính thể hiện ở bảng dưới:
Bảng 2.3. Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất RP1-RP18
Hợp chất
IC50 (àM)
Hep-G2 LU-1 MCF-7 HL-60 SK-Mel 2
RP1 84,70±3,45 84,82±6,67 77,92±4,54 56,14± 4,08 75,39± 4,83 RP2 13,99±2,13 14,75±1,30 16,04±2,04 14,76± 1,31 11,16± 1,40 RP3 71,26±3,99 63,38±2,45 63,76±3,91 46,33± 2,58 75,52± 6,69 RP7 56,03±2,25 62,20±3,41 55,85±2,96 48,30± 3,73 37,96± 0,07 ĐC 2,03 ± 0,3 1,96 ± 0,2 1,71 ± 0,2 2,16 ± 0,1 2,12 ± 0,3
ĐC Sử dụng Ellipticine làm đối chứng dương
Các hợp chất RP4-RP6, RP8-RP18 không thể hiện ho t tính g y đ c tế bào dối với 5 dòng tế bào ung thư tr n.
2.5.4. Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư của các hợp chất phân lập từ loài Xestospongia muta
Phép thử ho t tính g y đ c tế bào được thực hiện theo phương ph p được mô tả trong mục 2.2.3.1. Các hợp chất XM1-XM11 phân lập được t loài hải miên X. muta được thử ho t tính g y đ c tế bào in vitro trên 5 dòng tế bào ung thư ở người: Hep-G2, LU-1, MCF-7, HL-60, SK-Mel-2. Kết quả thử ho t tính được thể hiện ở bảng dưới:
Bảng 2.4. Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất XM1-XM11 Hợp chất
IC50 (àM)
Hep-G2 LU-1 MCF-7 HL-60 SK-Mel 2
XM1 0,43±0,03 0,76±0,09 0,44±0,05 0,62±0.08 0,77±0,13 XM2 0,75±0,11 0,96±0,09 0,79±0,05 0,88±0,17 1,02±0,11 XM3 6,58±0,94 9,20±1,21 7,36±1,16 7,84±0,85 11,23±0,33 XM4 5,06±0,39 5,63±0,19 5,32±0,67 5,65±0,42 5,45±0,91 XM5 5,55±0,98 5,84±0,45 5,68±0,89 6,58±0,94 6,24±0,96 XM6 6,85±0,76 9,88±0,98 7,82±0,53 9,19±0,72 7,51±0,69 XM7 30,35±3,04 32,59±2,56 24,85±1,21 22,95±0,95 35,92±4,87 XM8 19,52±1,45 22,25±1,26 24,85±0,91 16,79±0,74 23,04±2,47 XM11 34,31±3,43 34,83±0,54 37,96±1,01 19,14±1,58 36,63±1,40 ĐC 1,54 ± 0,37 1,38 ± 0,16 1,18 ± 0,12 1,34 ± 0,24 1,91 ± 0,28 ĐC Sử dụng Ellipticine làm đối chứng dương,
Các hợp chất XM9, XM10 không thể hiện ho t tính gây d c tế bào đối với 5 dòng tế bào ung thư thử nghiệm.
Đánh giá cơ chế chống ung thư của hợp chất XM1:
Hợp chất XM1 có ho t tính ức chế sự phát triển trên các dòng tế bào ung thư thử nghiệm m nh nhất. N n được lựa chọn để tiếp tục nghiên cứu cơ chế gây chết tế bào ung thư. Việc đ nh gi bao gồm:
Đ nh gi t c đ ng của hợp chất XM1 đến chu kì tế bào ung thư vú người MCF-7.
Đ nh gi t c đ ng của hợp chất XM1 lên sự thay đ i hình thái tế bào MCF-7
Đ nh gi t c đ ng của hợp chất XM1 lên quá trình tự chết của tế bào ung thư vú người MCF-7
Đ nh gi t c đ ng của hợp chất XM1 đến biểu hiện của các protein trên dòng tế bào MCF-7
Kết quả cho thấy hợp chất XM1 t c đ ng đến chu kì tế bào ung thư vú người MCF-7 ở pha G2/M. Đồng thời hợp chất này cũng g y n n qu trình apoptosis của tế bào thông qua làm thay đ i mức đ biểu hiện của các protein liên quan trong tế bào ung thư vú người MCF-7 như Caspase-3, Bax...
CHƯƠNG 3. THẢO LUẬN KẾT QUẢ