CHƯƠNG 3. THẢO LUẬN KẾT QUẢ
3.1. Xác định cấu trúc hóa học các hợp chất phân lập từ loài R. providentiae
3.1.12. Hợp chất RP12: rhabdaprovidine G (hợp chất mới )
Hình 3.30. Cấu trúc hóa học của hợp chất RP12 và hợp chất tham khảo RP10 Hợp chất RP12 thu được dưới d ng dầu màu vàng nh t. Trên ph khối lượng phân giải cao HR-ESI-MS của RP12 xuất hiện các pic ion giả phân tử t i m/z 471,3461 [M+H]+ (tính toán lí thuyết cho công thức C30H47O4 là 471,3474), m/z - 493,3289 [M+Na]+ (tính toán lí thuyết cho công thức C30H46O4Na là 493,3294),m/z 515,3390 [M+HCOO]- (tính toán lí thuyết cho công thức C31H47O6 là 515,3373); kết hợp với ph 13C-NMR cho phép x c đ nh công thức phân tử của RP12 là C30H46O4. T công thức phân tử tr n tính to n được đ không bão hòa của RP12 là 8. Trên ph 1H- NMR của hợp chất RP12 xuất hiện tín hiệu của 7 nhóm methyl singlet c ng hưởng t i δH 0,95, 1,05, 1,09, 1,49, 1,61, 1,68, 1,71 (3H, s); tín hiệu của 2 proton olefin t i δH 5,81 (d, J = 8,5 Hz), 5,10 (t, J = 6,5 Hz); tín hiệu của 3 proton oxymethine t i δH 4,15 (d, J = 5,5 Hz), 4,24 (br s), 4,70 (br dd, J = 6,5 Hz, 8,5Hz). Phân tích ph 13C-NMR thấy xuất hiện tín hiệu của 30 carbon trong đ có 1 carbon thu c nhóm carbonyl c ng hưởng t i δC 219,9; tín hiệu của 4 carbon olefin t i δC 121,8, 124,1, 131,6, 141,9 gợi ý cho sự xuất hiện 2 liên kết đôi; tín hiệu của 3 carbon oxymethine c ng hưởng t i δC
68,1, 76,3, 77,0; và tín hiệu của 22 carbon khác. T những dữ liệu ph 1H-NMR và
13C-NMR gợi ý hợp chất RP12 có d ng khung nh n 3 vòng ngưng tụ 6,6,5-tricyclic isomalabaricane.
Hình 3.31. Các tương tác HMBC, COSY và NOESY chính của hợp chất RP12
Bảng 3.12. Số liệu phổ NMR của RP12 và hợp chất tham khảo C *δCa,b δCa,b δHa,c (mult., J = Hz)
1 31,2 32,9 1,73 (m)/ 2,57 (m)
2 33,4 33,8 2,32 (m)/ 2,70 (m)
3 218,8 219,9 -
4 46,9 47,2 -
5 45,2 45,7 2,48 (dd, 2,5, 12,5)
6 18,9 19,4 1,41 (m)/ 1,58 (m)
7 35,8 34,4 1,40 (m)/ 2,04 (m)
8 41,2 42,6 -
9 50,6 54,1 1,90 (d, 3,0)
10 34,5 36,0 -
11 34,4 77,0 4,24 (br s)
12 207,1 76,3 4,15 (d, 5,5)
13 123,6 54,9 1,72 (d, 5,5)
14 172,2 54,0 -
15 - 36,4 1,13 (d, 13,5)/ 2,26 (dd, 6,0,
13,5)
16 19,3 68,1 4,70 (br dd, 6,5, 8,5)
17 23,5 121,8 5,81 (d, 8,5)
18 - 49,8 2,65 (d, 4,5)/ 2,76 (d, 4,5)
19 - 24,1 0,95 (s)
20 - 141,9 -
21 - 16,6 1,71 (s)
22 - 39,8 2,06 (m)/ 2,11 (m)
23 - 26,6 2,08 (m)/ 2,14 (m)
24 - 124,1 5,10 (t, 6,5)
25 - 131,6 -
26 - 25,7 1,68 (s)
27 - 17,8 1,61 (s)
28 29,2 29,3 1,09 (s)
29 19,4 19,4 1,05 (s)
30 24,7 36,5 1,49 (s)
aCDCl3,b125MHz, c500MHz. *δC số liệu của hợp chất RP10
Cấu trúc của RP12 bao gồm 1 nhóm carbonyl, 2 liên kết đôi C-C, 3 vòng của khung chính như vậy có thể dự đo n còn c th m 2 vòng ở phần m ch nh nh để phù hợp với đ không bão hòa là 8. Các số liệu NMR của RP12 được so sánh với số liệu của hợp chất RP10 thấy gần như tr ng khớp t v trí C-1 đến C-8, gợi ý cho sự thay đ i ở cấu trúc của RP12 bắt đầu t vòng 5 c nh. Các tương t c H-H trên ph COSY
gồm H-9 (δH 1,90)/H-11 (δH 4,24)/H-12 (δH 4,15)/H-13 (δH 1,72) và tương tác HMBC t H-30 (δH 1,49) đến C- 13 (δC 54,9) giúp qui kết các số liệu ph ở vòng C (5 c nh) của hợp chất RP12. Khác với các hợp chất RP9 và RP10, sự thay đ i hóa học của C- 11 (δC 77,0), C-12 (δC 76,3) và C-13 (δC 54,9) đặc trưng cho hai nh m oxymethine (C- 11 và C-12) và m t nhóm methine không đính với oxy (C-13). Cấu trúc phần m ch nh nh được x c đ nh dựa trên phân tích ph HMBC và COSY, bao gồm tương tác HMBC t các proton methyl H-26 (δH 1,68) và H-27 (δH 1 61) đến C-25 (δC 131,6) và C- 24 (δC 124,1), tương t c COSY giữa H-24 (δH 5,10)/H-23 (δH 2,08 và 2,14)/H-22 (δH 2,06 và 2,11) tương tác HMBC t H-21 (δH 1,71) đến C-22 (δC 39,8)/C-20 (δC 141,9)/C-17 (δC 121,8), tương t c COSY của H-17 (δH 5,81)/H-16 (δH 4,70)/H-15 (δH 1,13 và 2,26) và tương t c HMBC t H-18 (δH 2 65 và 2 76) đến C-15 (δC 36,4)/C-14 (δC 54,0)/C-13 (δC 54,9). Tiếp đ , tương t c HMBC giữa H-16 (δH 4,70) và C-12 (δC 76,3) cho biết cầu nối ether giữa C-16 và C-12. Ngoài ra, sự hiện diện của m t vòng epoxy t i C-14/C-18 đã được xác nhận bởi sự phù hợp v công thức phân tử của RP12 (C30H46O4) đ chuyển d ch hóa học của carbon methylene C-18 (δC 49,8), carbon không liên kết trực tiếp với hydro C-14 (δC 54,0), hằng số liên kết Jgeminal của proton H-18 (4,5 Hz) và so sánh số liệu ph của cấu trúc epoxy đã được công bố trong tài liệu tham khảo [76].
Tiếp tục phân tích ph NOESY và CD của hợp chất RP12 để x c đ nh lập thể của hợp chất này. Dựa vào tương t c NOESY giữa H-16 (δH 4,70) và H-21 (δH 1,71) x c đ nh được cấu hình của liên kết đôi C-17/C-20 là E. C c tương tác NOESY t H- 19 (δH 0,95) đến H-9 (δH 1,90) và H-29 (δH 1,05), t H-5 (δH 2 48) đến H-28 (δH 1,09) và H-30 (δH 1,49) cho biết cấu hình trans-syn-trans của 3 vòng A-C. Đi u đ c nghĩa là C-29, C-19, H-9 nằm cùng m t phía, giả sử cùng đ nh hướng β. Do đ tương tác NOESY của H-19 (δH 0,95) với H-11 (δH 4,24), H-9 (δH 1,90) với H-15ax (δH 2,26), H-15ax với H-16 (δH 4 70) đã chứng minh cho đ nh hướng β của H-11 và H-16. Và tương tác NOESY của H-17 (δH 5,81) với H-12 (δH 4,15), H-12 với H-13 (δH 1,71) đã gợi ý cấu hình α của H-12 và H-13. Vòng epoxy t i C-14/C-18 được x c đ nh là cấu hình α thông qua tương tác NOESY giữa H-30 (δH 1,49) và H-18 (δH 2,76). Cuối cùng, tiến hành phân tích ph CD thực nghiệm của hợp chất RP12 và so sánh với ph CD tính toán lý thuyết cho các cặp đồng ph n đối quang RP12a (5R, 8S, 9S, 10S, 11S, 12S, 13S, 14S, 16S) và RP12b (5S, 8R, 9R, 10R, 11R, 12R, 13R, 14R, 16R) cho phép
kết luận cấu hình tuyệt đối của RP12 là (5R, 8S, 9S, 10S, 11S, 12S, 13S, 14S, 16S). Do đ hợp chất RP12 được x c đ nh và đặt tên là rhabdaprovidine G.
Hình 3.32. Phổ CD thực nghiệm của hợp chất RP12 và phổ CD tính toán theo lý thuyết của đồng phân RP12a, RP12b
Hình 3.33. Phổ HR-ESI-MS (positive) của hợp chất RP12
Hình 3.34. Phổ HR-ESI-MS (negative) của hợp chất RP12
Hình 3.35. Phổ CD của hợp chất RP12
Hình 3.36. Phổ 1H-NMR của hợp chất RP12
Hình 3.37. Phổ 13C-NMR của hợp chất RP12
Hình 3.38. Phổ HSQC của hợp chất RP12
Hình 3.39. Phổ HMBC của hợp chất RP12
Hình 3.40. Phổ COSY của hợp chất RP12