CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.5. Phương pháp nghiên cứu
2.5.11. Phương pháp khảo sát khả năng bảo quản hạt giống khỏi nấm mốc
Sơ đồ thí nghiệm được trình bày như trên hình 2.6
60
Hình 2.6: Sơ đồ khảo sát khả năng bảo quản hạt giống khỏi nấm mốc Aspergillus sp.
CĐP1
Chủng vi khuẩn lactic được tăng sinh trong môi trường lên men chọn được ở nội dung 2 ở 37 0C trong 24 giờ, tỉ lệ cấy giống là 5 %, mật độ tế bào được đưa về 108 cfu/ml, bổ sung thêm 0.1 % Tween 80 và đem xử lý ở các điều kiện khác nhau như trên bảng 2.1
Bảo quản ở nhiệt độ phòng và theo dõi tơ nấm mọc theo các
ngày
Các chủng VK lactic 108 cfu/ml
Ngâm 15 phút Khử trùng bề mặt
Hạt đậu phộng
Vào chai thủy tinh 100 ml vô trùng Ngâm
Làm khô Điều chỉnh pH,
xử lý nhiệt độ
Phối theo tỷ lệ
61
Hạt đậu phộng được chọn lựa kĩ càng, đồng đều nhau, không có hư hỏng, nứt hạt.
Hạt được rửa sạch bằng nước cất và để ráo. Sau đó cứ 50 g hạt mỗi loại được ngâm trong 120 ml dung dịch. Có công thức phối trộn và xử lý như sau:
Thí nghiệm 1: Dịch nuôi cấy không trung hoà pH.
Đối chứng 1 Nước cất Đối chứng 2 Daconil 0.5g/l
Nghiệm thức 1
1 Dịch nuôi cấy L5 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L3 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L2N không gia nhiệt 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 2
1 Dịch nuôi cấy L5 không gia nhiệt 2 Dịch nuôi cấy L3 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L2N không gia nhiệt 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 3
1 Dịch nuôi cấy L5 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L3 không gia nhiệt 2 Dịch nuôi cấy L2N không gia nhiệt 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 4
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 65°C trong 15 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 5
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 2 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 65°C trong 15 phút 0.1% Tween 80
62 Nghiệm thức 6
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 2 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 65°C trong 15 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 7
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 85°C trong 10 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 8
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 2 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 85°C trong 10 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 9
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 2 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 85°C trong 10 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 10
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 100°C trong 3 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 11
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 2 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 100°C trong 3 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 12 1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 100°C trong 3 phút
63
2 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 100°C trong 3 phút 0.1% Tween 80
Thí nghiệm 2: Dịch nuôi cấy trung hoà pH về 5.0 Đối chứng 1 Nước cất
Đối chứng 2 Daconil 0.5g/l
Nghiệm thức 1
1 Dịch nuôi cấy L5 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L3 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L2N không gia nhiệt 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 2
1 Dịch nuôi cấy L5 không gia nhiệt 2 Dịch nuôi cấy L3 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L2N không gia nhiệt 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 3
1 Dịch nuôi cấy L5 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L3 không gia nhiệt 2 Dịch nuôi cấy L2N không gia nhiệt 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 4
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 65°C trong 15 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 5
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 2 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 65°C trong 15 phút 0.1% Tween 80
64 Nghiệm thức 6
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 2 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 65°C trong 15 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 7
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 85°C trong 10 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 8
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 2 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 85°C trong 10 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 9
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 2 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 85°C trong 10 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 10
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 100°C trong 3 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 11
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 2 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 100°C trong 3 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 12 1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 100°C trong 3 phút
65
2 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 100°C trong 3 phút 0.1% Tween 80
Thí nghiệm 3: Dịch nuôi cấy trung hoà pH về 6.0 Đối chứng 1 Nước cất
Đối chứng 2 Daconil 0.5g/l
Nghiệm thức 1
1 Dịch nuôi cấy L5 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L3 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L2N không gia nhiệt 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 2
1 Dịch nuôi cấy L5 không gia nhiệt 2 Dịch nuôi cấy L3 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L2N không gia nhiệt 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 3
1 Dịch nuôi cấy L5 không gia nhiệt 1 Dịch nuôi cấy L3 không gia nhiệt 2 Dịch nuôi cấy L2N không gia nhiệt 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 4
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 65°C trong 15 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 5
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 2 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 65°C trong 15 phút 0.1% Tween 80
66 Nghiệm thức 6
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 65°C trong 15 phút 2 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 65°C trong 15 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 7
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 85°C trong 10 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 8
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 2 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 85°C trong 10 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 9
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 85°C trong 10 phút 2 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 85°C trong 10 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 10
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 100°C trong 3 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 11
1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 2 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 100°C trong 3 phút 0.1% Tween 80
Nghiệm thức 12 1 Dịch nuôi cấy L5 gia nhiệt 100°C trong 3 phút 1 Dịch nuôi cấy L3 gia nhiệt 100°C trong 3 phút
67
2 Dịch nuôi cấy L2N gia nhiệt 100°C trong 3 phút 0.1% Tween 80
Bảng 2.1: Bố trí thí nghiệm bảo quản trong chai.
Đối chứng âm thay dịch vi khuẩn bằng nước cất, đối chứng dương thay dịch vi khuẩn bằng dung dịch daconil 0,5g/l. Sau từng khoảng thời gian thích hợp với mỗi loại hạt, hạt được để khô ở nhiệt độ phòng, phối vào các chai thuỷ tinh đã được hấp khử trùng.
Các chai được đặt ở nơi khô thoáng và theo dõi kết quả từng ngày và ghi nhận kết quả thời gian nấm mốc bắt đầu phát triển.
Các thí nghiệm lặp lại 3 lần.